2.准备铺胶：
a) 4 °c溶emc胶过夜。
b) 将细胞小室、培养板和枪头等于4°c 预冷。
c)用无血清的冷培养基稀释ecm胶至20ug/ml，以5-10ug/cm2的密度加入到细胞小室的上层（按照ecm产品说明书的推荐比例和体积），轻轻摇晃使胶均匀铺在膜上。以上操作在冰上进行。
d)立即将铺好ecm胶的细胞小室置于培养板中，于37℃孵育1小时，ecm胶可由液体凝成固体，吸走多余的或者未凝的胶。
3.细胞用pbs清洗一次，edta或者0.05%胰酶消化，然后用包含5% bsa的无血清培养基中和，1500rpm离心5-10min。
4.用无血清培养基重悬细胞，调整细胞密度至0.5-2.0 x106cell/ml。
5.取上述200μl细胞液加入小室，下室（培养板）加入900l含有10% fbs的培养基。不同规格的小室和培养板所加的体积不同，具体参考millicell r 产品说明书以配合24孔板的8μm pet膜millicell 悬挂式细胞培养小室（cat#mcep24h48）为例，实验周期：3-5天
6. 37 ℃孵育24至72小时，依据肿瘤细胞类型而定。
7.孵育结束，小心取出细胞小室，吸掉小室上层培 养液，pbs清洗一遍，70%酒精或者4%多聚甲醛固 定5min，0.5%结晶紫（2%乙醇或pbs溶解）染色 20min，然后进行第8步或者第9步。
8. pbs清洗两次以去除多余的染料，立即用棉签擦 去滤膜上层的细胞，自然静置风干。显微镜下观察 滤膜下层的细胞，随机选取不同的视野计数并算平均值。
9. 结晶紫溶解滤膜下层细胞株，然后用33%醋酸脱色， 将结晶紫*洗脱下来，洗脱液可在酶标仪上570 nm读取od值。这种方法可以避免视野下细。
20mg/支 分子式： c30h52o4
分子量： 476
20(r)原人参三醇 20(r)protopanaxatriol
雪胆素甲
雪胆素乙
20mg/支 479-91-4 蔓荆子黄素 vitexicarpin
龙血素b
10mg/支 102036-29-3 原苏木素b protosappanin b
辛夷脂素
20mg/支 13476-25-0 乌药醚内酯 linderane
20mg/支 528-48-3 漆黄素 fisetin
苦玄参苷ia
20mg/支 1415-73-2 芦荟苷 aloin
细胞株