在高效液相色谱仪(hplc)测试中，糖类的分子通常采用通用型检测器检测，如示差折光检测器(ri)进行检测。但采用ri检测器有两个明显的缺点：灵敏度低、不能梯度洗脱。采用磷酸-苯肼柱后衍生法测定糖类，可以克服ri检测器的以上两个缺点。
下面我们使用日立chromaster高效液相色谱仪，利用磷酸-苯肼柱后衍生法进行糖类的分析。色谱柱将糖类分离，再与磷酸-苯肼溶液在高温下反应，使用有选择性，高灵敏度的荧光检测器进行检测，梯度洗脱可以多种糖成分同时分析。此方法克服了示差折光检测器的灵敏度低和不能梯度洗脱的缺点。
■ 流路图
仪器配置: chromaster 5110 泵，5210 自动进样器，5310 柱温箱，5410 uv检测器，5510反应单元
■ 标准品测定例
■ 系统适用性（100 mg/l 糖标准混合液）
分别对硅胶基质和聚合物基质色谱柱的系统适用性进行评价，理论塔板数按蔗糖峰计算，分离度以葡萄糖和半乳糖的分离度计算，结果得到色谱柱的理论塔板数和分离度如上表所示。聚合物基质色谱柱的测定，理论塔板数较低，但色谱柱的寿命较长；硅胶基质色谱柱的测定，色谱峰的峰形尖锐，分离度改善很多。后续实验均采用硅胶基质色谱柱。
■线性
以半乳糖和蔗糖为例，各种糖成分在10 ~ 500 mg/l标准混合液的浓度范围内，r2 ≥ 0.9995，线性关系良好。
■ 重现性
■ 枣样品的分析结果
对大枣样品进行了糖成分的分析，结果在枣中检测到果糖、葡萄糖和蔗糖成分，并且均得到很好的分离效果。