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二抗特异性可考虑方面

2024/7/17 0:59:59发布20次查看
二抗特异性是指一抗或免疫球蛋白被二抗识别的区域或链。可能需要实际运用的时候在考虑以下方面:
1、抗igg (h+l):
一种具有(h+l)标记的二抗,靶向igg分子的重链和轻链(即fc和fab区域)。这些抗体也会与其他类(如ige、igd等)发生反应,因为这些类之间共享轻链。更广泛的表位识别(h+l)二抗使其适用于大多数需要二抗的免疫分析。
2、抗igg fc片段或重链:
与(h+l)二抗不同,以靶免疫球蛋白fc区域或重链为靶点的二抗具有类特异性,不会与其他类免疫球蛋白发生反应。针对fc片段的二抗被吸附在f(ab’)2片段上。如果打算在ip后进行western blot分析,建议使用重链特异性二抗来检测大于55kd或小于45kd的蛋白的表达。针对(h+l)区域的二抗将识别用于免疫沉淀的一抗的还原和变性重链(50 kda)和轻链(25 kda)。此外,fab片段抗fc二抗可用于一抗在多次标记实验孵育前预标记。
3、抗igg f(ab’)2片段:
一种具有f(ab’)2标记的二抗,靶向于igg一抗的f(ab’)2区。这些抗体被吸附在fc片段上,但由于识别了f(ab)区域的共享轻链,它们会与其他类发生反应。
4、抗igg轻链:
一种轻链特异性二抗靶向igg轻链(kappa或lambda)。这些抗体不与一抗重链反应,但识别其他免疫球蛋白类的共享轻链。例如,山羊抗人igg kappa轻链二抗不仅能识别igg亚类,还能识别iga、igd、ige、igm等轻链。在ip后进行western blot分析时,建议使用轻链特异性二抗来检测大于30 kda蛋白的表达。western blot分析中使用的a (h+l)特异性二抗将识别免疫沉淀步骤中使用的一抗的重链(50 kda)和轻链(25 kda)。使用轻链特异性二抗,去除50 kda的重链带,可以清晰的检测到大于30 kda的蛋白。
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