不同牌号的sb色谱柱分离的色谱峰保留时间可在小范围内移动,但峰的顺序和分辨率不变,可改变流速或溶剂强度(反相色谱加水调节)进行校正。如果谱图中色谱顺序发生了变化,或者两峰重叠在一起,问题就比较严重。保留时间发生大的变化,主要由柱填料硅酸相互作用所致,另外有次级保留因素的影响。硅胶为基质的填料表面含有硅醇,有的封尾填料可部分去掉硅醇、不封尾填料的硅胶表面硅醇基更多。酸性或碱性分子可与硅醇发生不同程度的相互作用。硅酸与样品分子作用的强弱,因不同批号的硅胶和不键合相填料而异。即使同批号的硅胶而不同批号的键合相也有差异。硅醇对阳离子或碱性样品影响大。参照下列要求做可以减少色谱柱之间保留时间的变化:
1.仅用同一厂商的柱。实际上不具可操作性,但起码作某一专门分析方法时要用同一厂商的柱。
2.设计分离条件,使保留值变化小(建立标准的方法)。
3.选用液相色谱系统或色谱柱对次级保留因素(外界)灵敏度低。
4.换新柱时调整分析条件保持旧柱的保留值(改变条件)。这一步工作是*的,在*的常规分析中,不会从头至尾用一根柱,中间总要换新柱,每换一次,都应仔细地调整各组分的保留。