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PCR的技术步骤

2024/6/25 17:58:57发布37次查看
pcr即聚合酶链式反应(polymerase chain reaction)的缩写,它是体外酶促合成特异(dna)片段的方法。这一方法的要点是合成两个分别互补于待扩增(dna)片段两端的小片段引物,在含有引物、待扩增dna模板核苷酸底物和dna多聚酶的反应体系中dna复制反复进行,在短时间内可以取得大量扩增产物。其原理是寡聚核苷酸链引物在dna聚合酶的作用下沿模板延伸,合成两个与靶dna两侧序列互补的引物,在体外进行靶dna的重复合成。
主要的技术步骤是:
(1)dna变性 加热使靶dna序列双链解离成单链dna。
(2)引物与靶dna退火 适当降低温度,使两个引物分别结合成靶dna两条的3′末端向5′末端延伸。
(3)引物延伸 在dna聚合酶的催化下,引物沿着靶dna3′末端向5′末端延伸。新合成的dna链在变性解离后,又可作为模板与引物杂交,并且在dna聚合酶的催化下,引导合成新的靶dna链。如此反复进行以上3个步骤,即可使靶(dna)片段指数性扩增。
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