建议加样顺序是阴性质控品、待检样本、阳性质控品。4. pcr扩增（扩增区）
1) 仪器设置（以abi prism 7500为例）
将pcr反应管放入pcr仪内，按照对应顺序设置阴性质控品(ntc)、阳性质控品(standard)及待检样本(unknown)。reporter dye为fam，quencher dye为none，参比染料(passive reference)为none。
2 ） 扩增程序
40cycles
50℃10min
95℃3min
95℃10sec
60℃1min
60℃采集荧光信号，反应体系为25 μl。
样品 rna 的制备
1. 如果有n个样品，*设置n+2个提取，多出的一个是pc（样品制备阳性对照），一个是 nc（样品制备阴性对照）。可以用10μl阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为pc。另外用水作为nc。
2. 用自选方法纯化样品的rna，本试剂盒跟市场上大多数病毒rna提取试剂盒兼容。也以选购本公司的柱式病毒rnaout。本试剂盒免费赠送20次免rna提取的核酸释放剂试用装，该释放剂的裂解液可以直接作为rt-pcr模板，省略了rna提取步骤。