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线性聚乙烯亚胺PEI MW25000说明书

2024/6/16 9:56:32发布26次查看
产品描述biohub 线性聚乙烯亚胺pei mw25000 转染试剂系列是基于聚乙烯亚胺(polyethylenimine,pei)的产品,因其较高的转染效果,已广泛应用于aav,lv和重组蛋白等工业化生产。
聚乙烯亚胺是一种具有较高阳离子电荷密度的有机大分子,每相隔两个碳原子,即每第三个原子都是质子化的氨基氮原子,使得聚合物网络在任何ph下都能充当有效的“质子海绵”体(proton sponge),因此,非常容易结合带负电荷的核酸分子,形成带正电荷的复合物颗粒,该颗粒与细胞表面阴离子结合,很容易通过内吞作用进入细胞;并且可抵御溶酶体的降解作用,从而提高核酸分子的表达水平。
基本信息
cas 9002-98-6
分子式 (ch2ch2nh)n
分子量 25,000
熔点 73-75℃
溶解性 溶于热水,低ph值的冷水,甲醇和乙醇;
不溶于 苯、yi醚、丙酮
形式 白色固体
生物毒性 未知
安全防护 手套及口罩
存储 pei 内含自由氨基,建议开封后 4℃干燥保存,减缓氧化过程。效期:3年
运输 常温
特点 大量实验数据反馈,细胞通用性好,有非常好的转染效果,尤其对293,cho细胞系有特别显著的转染效果。
配置方法
转染操作流程:(贴壁细胞转染方法)
1. 接种细胞: 转染前一天,用胶原酶(biohub cat#78cl10002)消化细 胞并计数(不建议用胰酶)。调整细胞浓度,将细胞铺入细胞培养的器皿,每个孔置 入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到 70~80%。
2. 准备 dna-pei 复合物: dna、pei 试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升 至室温。依据表 1 所示,用 opti-mem itm或其他适合的无蛋白培 养基稀释适量 dna。用同样的培养基稀释 pei 试剂。每 1 μg dna 需用 1-5 μl 线 性 pei 转染试剂(这个需要客户自行摸索配比,每一批转染试剂和每一批 dna 比例可 能会稍有不同)。一边轻轻涡旋装有 dna 溶液的试管,一边将稀释的线性 pei 转染 试剂滴加至试管中(注意:请勿颠倒添加顺序)。充分混匀后,室温静置 10~25 min 以形成 dna-pei 复合物。当溶液体积较大时,请用圆底聚丙烯管,例如 nest 5 ml /14 ml 离心管。
3. 转染细胞: 直接向每个孔中加入 dna-pei 复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在 无血清条件下转染时,去除生长培养基,替换成无血清培养基,然后滴 dna-pei 复合 物。转染 3 h 后,添加½体积的包含 30%血清的生长培养基。
4. 孵育细胞和分析结果: 在 co2 培养箱中 37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染 后最快 7 h 即可检测到转入基因的表达。
5. 转染 24 h 后,将细胞传代至新鲜的生长培养基中(将细胞稀释 10 倍 以上),在 co2 培养箱中 37℃孵育过夜。第二天加入与转染抗性基因相匹配的筛选药物。约 1~2 周可 筛选到耐药性克隆,在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。
转染操作流程:(悬浮细胞转染方法)
1. 转染前准备:悬浮细胞传代接种于适量含悬浮细胞生长培养基中,合适条件下培养。根据培养瓶大小调整细胞密度(例100ml培养瓶,1x10 6 cells/ml),然后旋紧瓶口放入摇床继续培养,2~4小时后可以进行转染。
2. 准备 dna-pei 复合物:dna、pei 试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室。用 opti-mem itm或其他适合的无血清培养基稀释适量 dna。用同样的培养基稀释 pei 试剂。每 1 μg dna 需用 1-5 μl 线性pei转染试剂。一边轻轻涡旋装有 dna 溶液的试管,一边将稀释的线性pei转染试剂滴加至试管中(注意:请勿颠倒添加顺序)。充分混匀后,室温静置 10~25 min 以形成 dna-pei复合物。当溶液体积较大时,请用圆底聚丙烯管,例如 nest 5 ml /14 ml 离心管。
3. 转染细胞:将pei-dna转染复合物逐滴加入到细胞培养液中,摇匀后旋紧瓶口放回摇床合适培养条件下培养至可以分析检测。
4. 孵育细胞和分析结果:转染后一般24-72h即可检测到转入基因的表达。 请自行确定适合的检测时间。
5. 如果要获得更多的蛋白产量,有文献表明转染后24小时,可以适当稀释细胞,稀释比例参考范围(1:1—1:5)之间,可以增加蛋白产量,稀释效应与最佳稀释比率应根据经验确定。
产品背景 biohub 生产的78bio pei是一种优化的线性阳离子聚合物转染试剂,分子量分别为 25000 和 40000,78biopei40000 相比 25000 转染效率高,但毒性也略大于 78pie25000。在 hek293 和 cho 的蛋白表达系统中,相比于市面上的脂质体 78biopei 都表现出高的蛋白表达量(无 论是 96 孔板还是 100l 的细胞反应器),以及更小的细胞毒性、更高的转染效和更高的可 重复性,并且十分经济的高性价比转染试剂。产品具有以下特点:
1.转染效率高,细胞毒性低; 蛋白表达量高;
2.节约成本:biohub 78 pei转染试剂 ,进口品质,亲民价格,至少能够降 40% 的转染试剂总成本;
3.适用于 hek293 等真核细胞的转染;
4.适用于贴壁细胞和悬浮细胞的转染;
5.适用于有血清和无血清的转染条件;
6. 无机试剂,无动物源成分;
7. 产品稳定,质控严格;
8. 工艺流程适用范围广,容易优化 适合小规模培养板,培养瓶到大规模的生物反应器。
产品反馈
注意事项 1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
2. 本产品主要用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
3.加热或加酸都有助于 78biopei 溶解。当然酸可能不用加那么多,详细用量可试加一点 ,搅拌看看,足够溶解就行,不一定需要加到 ph 那么低。
4.一定要溶解充分,溶解不充分会影响后续的转染效率.
5.冷冻后可能会影响其后续转染效果。
特别提醒:初次使用 78pei 进行不同基因转染时应先做预试,优化出适合自己实验的, 最佳 pei 和 dna 的比例,通常筛选范围在 1:1 到 5:1 之间,如果之前用过polysciences品牌的 pei,我们的活性是其1.5倍左右,用 78biopei 时应适当降低使用浓度。
货号
品名 规格 品牌
线性聚乙烯亚胺pei mw250
78pei25000-100mg 100mg biohub
线性聚乙烯亚胺pei mw250 78pei25000-1g 1g biohub
线性聚乙烯亚胺pei mw250 78pei25000-5g 5g biohub
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