（分光光度法，50t/24样）
一、测定意义：
辅酶i nad(h)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞
中，nad+是糖酵解（emp）和三羧酸循环（tca）的主要
氢受体，生成的nadh经电子传递链（又称呼吸链，etc）
传递把电子交给氧，在合成atp的同时，形成大量的活性
氧（ros），同时nadh再生为nad+。糖、脂、蛋白质三
大代谢物质分解中的氧化反应绝大部分通过这一体系完
成。nad(h)含量及nadh/nad+比值的高低可用于评价糖酵
解和tca循环的强弱。较高的nad(h)及nadh/nad+比值说
明细胞呼吸耗氧量较高，处于过氧化状态。此外nadh/nad+
比值升高液可抑制糖酵解和tca循环。另外，nad+降解产
物对细胞信号传导、代谢和基因表达等具有重要的调控作
用。
二、测定原理：
分别用酸性和碱性提取液提取样品中nad+和nadh，nadh
通过pms的递氢作用，还原氧化型噻唑蓝（mtt）为甲䐶
（formazan），在570nm下检测吸光值；而nad+可被乙
醇脱氢酶还原为nadh，进一步采用mtt还原法检测。
三、需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、移液器、1ml比色皿、研
钵、冰和蒸馏水
五、nad+和nadh提取：
1.血清（浆）中nad+和nadh的提取
nad+的提取：按照血清（浆）体积（ml）：酸性提取液体
积（ml）为1：5-10的比例（建议取约0.1ml血清（浆），
加入1ml酸性提取液），煮沸5min（盖紧，以防止水分散失）；
冰浴中冷却后，10000g 4℃离心10min；取上清液至另一新
的离心管中，加入等体积的碱性提取液使之中和，混匀，
10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
nadh的提取：按照血清（浆）体积（ml）：碱性提取液体
积（ml）为1：5-10的比例（建议取约0.1ml血清（浆），
加入1ml碱性提取液），煮沸5min（盖紧，以防止水分散失）；
冰浴中冷却后，10000g 4℃离心10min；取上清液至另一新
的离心管中，加入等体积的酸性提取液使之中和，混匀，
10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2.
组织中nad+和nadh的提取
nad+的提取：按照组织质量（g）：酸性提取液体积（ml）
为1：5-10的比例（建议取约0.1g组织，加入1ml酸性提取
液），冰浴研磨，煮沸5min（盖紧，以防止水分散失）；冰
浴中冷却后，10000g 4℃离心10min；取上清液至另一新的
离心管中，加入等体积的碱性提取液使之中和，混匀，
10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
nadh的提取：按照组织质量（g）：碱性提取液体积（ml）
为1：5-10的比例（建议取约0.1g组织，加入1ml碱性提取
液），冰浴研磨，煮沸5min（盖紧，以防止水分散失）；冰
浴中冷却后，10000g 4℃离心10min；取上清液至另一新的
离心管中，加入等体积的酸性提取液使之中和，混匀，
10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3.
细胞或细菌中nad+和nadh的提取
nad+的提取：先收集细胞或细菌到离心管内，弃上清，按
照细菌或细胞数量（104个）：酸性提取液体积（ml）为
500-1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1ml酸
性提取液），超声波破碎1min（冰浴，强度20％或200w，
超声2s，停1s），煮沸5min（盖紧，以防止水分散失）；冰
浴中冷却后，10000g 4℃离心10min；取上清液至另一新的
离心管中，加入等体积的碱性提取液使之中和，混匀，
10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
nadh的提取：先收集细胞或细菌到离心管内，弃上清，
按照细菌或细胞数量（104个）：碱性提取液体积（ml）为
500-1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1ml碱
性提取液），超声波破碎1min（冰浴，强度20％或200w，
超声2s，停1s），煮沸5min（盖紧，以防止水分散失）；冰
浴中冷却后，10000g 4℃离心10min；取上清液至另一新的
离心管中，加入等体积的酸性提取液使之中和，混匀，
10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
辅酶i nad(h)测定试剂盒nad + 的提取
关键词：分光光度计 台式离心机 移液器