常用的检测核酸的方法有:
1)紫外吸光法(a260),该法操作简便,但dna样品中核苷酸、单链dna、rna和蛋白质对紫外吸收信号影响很大,还容易受到核酸样品中污染物的干扰,不能区分dna和rna,而且灵敏度低(δa260=0.1相当于5ug/ml的dsdna);
2)探针杂交法,该法是传统检测微量dna的常用方法,基本能满足目前疫苗和治疗性生物制品的检测需求,但是该法耗时较长,操作繁琐,稳定性、敏感性和特异性较差;
3)hoechst33258染料法,hoechst33258是一种一定程度上特异于双链dna的核酸染料,基本不受蛋白质的干扰,可以检测低至10ng/ml的dna;在检测稳定性和灵敏度上仍达不到理想效果。
picogreen dsdna定量法:picogreen仅在与dna双链结合后才发出荧光,且所产生的荧光与dna浓度呈正比,在存在ssdna、rna和单体核苷酸的条件下,可以选择性地检测低至25pg/ml的dsdna。该分析在三个数量级范围内呈线性,且几乎无序列依赖性,可以精确地测量多个来源的dna,包括基因组dna、病毒dna、小量提取dna或pcr扩增产物。
相比传统的方法,picogreen dsdna quantitation reagent定量具有以下优势:
①灵敏度高:数量级较uv吸光读数更敏感,可节省宝贵的样品;
②特异性强:在等摩尔的rna存在的条件下,对dsdna具有特异性;
③耐受性好:耐受较高浓度的盐、尿素、乙醇、lv仿、去垢剂、蛋白或琼脂糖,可以直接定量pcr扩增产物而无需从反应混合物中纯化dna。
④易于使用——只需在样品中加入染料,等待5分钟,然后读数即可,且适用于96和384孔板;与大多数基于荧光的酶标仪和荧光计兼容。
⑤适用范围广:可适用于pcr的分析、芯片样品、dna损伤分析、酶活性分析、基因组dna定量以及复杂混合物中dsdna的检测和病毒dna定量等多种领域。
若每次分析体积为2 ml,1ml picogreen定量试剂足够200次分析使用,若使用微孔板或96孔板检测,每次使用量200μl,则足够2000次分析。另外,我公司提供【双链dna(dsdna)定量检测试剂盒】方便客户选用。
储存条件:4℃避光干燥,有效期6个月。
注意事项:
1)picogreen定量试剂含有dmso(已知有毒试剂),请小心操作;
2)尽管目前尚未有数据表明picogreen具有诱变性和毒性,但是该试剂能结合双链dna,请操作时务必小心。
