１ 材料与方法
１．１ 仪器与软件
ｔｕ－１８１０紫外可见分光光 度计（北 京 普 析 通 用 仪 器 有 限 责 任 公 司）；ｍｕｌｔｉｓｋａｎｆｃ酶标仪［赛默飞世尔科技（中国）有限公司］；ql-866涡旋混合器（海门市其林贝尔仪器制造有限公司）；ｄｚｋｗ－４电热恒温水浴锅（北 京 中 兴 伟 业仪器有限 公 司）；ｆａｉ６０４万 分 之 一 天 平（上 海 天 平仪器厂）；ｊａ５００３ｂ千分之一天平（上海越平仪器有限公司）；ｓｉｇｍａ 高速冷冻离心机（北京五洲东方科技发 展 有 限 公 司）；ｂｒａｎｄ 移 液 枪 （德 国 ｂｒａｎｄ 公司）；ｋｑ５２００ｅ*（昆山市超声仪器有限公司）；ｓｔａｒｔｅｒ２１００ｐｈ 计（深圳市展华仪器仪表 有 限 公 司 ）；ｇａｓｔｒｏｐｌｕｓｔｍ （ｖｅｒｓｉｏｎ９．５．０００４ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓｐｌｕｓｉｎｃ．，ｌａｎｃａｓｔｅｒ，ｃａ，ｕｓａ）；ａｄｍｅｔｐｒｅｄｉｃｔｏｒｔｍ软件（ｖｅｒｓｉｏｎ８．１．０．０）。
１．２ 试 剂
猪 胰 脂 肪 酶 （上 海 源 叶 生 物 有 限 公司）；对硝基苯基棕榈酸酯（ｐ－ｎｐｐ）（≥９８％，阿法埃莎化学有限公司）；脱氧胆酸钠（纯度：＞９９．０％，上海江莱 生 物 科 技 有 限 公 司）；二 甲 基 亚 砜（ｄｍｓｏ）（北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司）；*、异丙醇、高 氯 酸（北 京 化 工 厂）、氢 氧 化 钠（天 津市光复科技发展有限公司）均 为 分 析 纯；奥 利 司 他（纯度：≥９８％，中山万汉医药科技有限公司）、新利司他（纯度：≥９８％，上海源叶生物科技有限公司）；娃哈哈饮用纯净水（杭州集团娃哈哈有限公司）。
１．３ 方法
１．３．１ 胰脂肪酶溶液的制备
精密称定胰脂肪酶１００ｍｇ，于 ５０ ｍｌ 离 心 管，加 入 １０ ｍｌ 冷 的 ５０ｍｍｏｌ·ｌ－１磷 酸 盐－５ｍｍｏｌ·ｌ－１脱 氧 胆 酸 钠 缓 冲 液（ｐｈ８．０），３０００ｒ·ｍｉｎ－１涡旋５ｍｉｎ，４ ℃下离心半径７．４ｃｍ，７０００ｒ·ｍｉｎ－１离心１０ｍｉｎ，倾出上清液至一新的离心管，即得。使用时保存在０～６℃冰水浴环境。
１．３．２ 胰脂肪酶抑制剂ｉｃ５０的测定
精密称取*、新 利 司 他 各 １０ ｍｇ 至 于 １０ ｍｌ 量 瓶 中，ｄｍｓｏ 溶解并 定 容，冷 藏 储 存，使 用 前 取 出 室 温 融化，摇匀后以缓冲液稀释得系列不同浓度的抑制剂溶液（*终浓度０～２８８０ｎｍｏｌ·ｌ－１；新利司他终浓度０～６１４４ｎｍｏｌ·ｌ－１）。分别取０．３ｍｌ抑制剂溶液和上述已制备的酶溶液于试管中，加缓冲液补至２．７ｍｌ，摇匀，３７ ℃水浴温孵１５ｍｉｎ，加入１ｍｍｏｌ·ｌ－１ｐ－ｎｐｐ底物溶液０．３ｍｌ，３７℃水浴１０ｍｉｎ后立即于４０５ｎｍ 测定其吸光度，空白以等量不含抑制剂的 溶 液 代 替，每 组 反 应 平 行３次。ｉｃ５０计算采用公式（１），其中 ｋ 为曲线的上限值，ａ为增长速度，采用三参数ｌｏｇｉｓｔｉｃ曲线拟合求解。
２ 结果
胰脂 肪 酶 作 用 于ｐ－ｎｐｐ分解出 对 硝 基 苯 酚 （ｐ－ｎｐ），该 产 物 在 ４０５ｎｍ 处有吸收峰，浓度 与 吸 光 值 成 正 比。测 定 奥 利司他、新利司他在不同浓度条件下与酶反应后的吸光度，从 而 得 出 其 对 胰 脂 肪 酶 的 抑 制 活 性。*、新利司他对胰脂肪酶的抑制考察，随着抑制剂浓度的增大，抑 制 率快速增大， 抑 制 率 均 近１００％。采用 公 式（１）计算得*的ｉｃ５０为１９．１ｎｍｏｌ·ｌ－１，新利 司他的ｉｃ５０为７６ｎｍｏｌ·ｌ－１。
３ 讨论
*和新利司他作为强效的胃肠道脂肪酶抑制剂，是目前*的用于治疗肥胖症的药 物。本研究测定得 奥 利 司 他 的ｉｃ５０为１９．１ｎｍｏｌ·ｌ－１，新利司他的ｉｃ５０为７６ｎｍｏｌ·ｌ－１，均为纳摩尔级抑制。尽 管ｉｃ５０对 评 估 药 物对酶的潜在抑制作用有较大的价值，但因其只能反应药物－靶标结合的平衡状态，不能反映整个结合的动力学过程，且无法预测药物对酶抑制的快慢和作用持续的时间等，存在较大局限性使其无法与体内的药效活性建立关联。
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