1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在、第二孔中分别加标准品100μl，然后在、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为1800ng/l，1200ng/l ，600ng/l，300ng/l， 150ng/l）。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品*终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将30（48t的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48t的20倍）倍稀释后备用。
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂a50μl，再加入显色剂b50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（od值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
aurora a+b+c有丝分裂激酶a/b/c抗体
phospho-alk (tyr1278 + tyr1282 + tyr1283)磷酸化间变型淋巴瘤激酶抗体
phospho-arfaptin 2 (ser260)磷酸化adp核糖基化因子结合蛋白2抗体
phospho-aurora b (thr232) + aurora c (thr198)磷酸化有丝分裂激酶b/c抗体
phospho-acinus (ser1180)磷酸化腺泡acinus蛋白抗体
phospho-adrb2 (ser346)磷酸化肾上腺素能受体β2抗体
apsaps抗体
acvrl1激活素受体样激酶1抗体
acvr1b激活素a受体1b抗体
phospho-androgen receptor (ser597)磷酸化雄激素受体抗体
phospho-a raf (ser214)磷酸化a-raf抗体
asah2酰基鞘氨醇脱酰酶2抗体
asam脂肪细胞特异性粘附分子抗体
aav5 capsid vp2 protein腺相关病毒5抗体
ampk gamma 3腺苷酸活化蛋白激酶γ3抗体
ampk beta 2腺苷单磷酸活化蛋白激酶β2抗体
phospho-apc1 (ser355)磷酸化细胞周期末期促进复合蛋白apc1抗体