哺乳动物及人源细胞培养的适温度为35-37v，对低温耐受力比高温强。39℃以上的培养环境细胞容易受损，甚至死亡。不低于0℃时（(0-34℃)，细胞能生存，但代谢降低、分裂延缓。
（二）气体环境和ph
动物细胞培养需要o2和co2。o2通量过大对细胞有毒害，一般使用空气中的o2含量就可以。co2则与维持培养基的ph有关，细胞培养的-佳ph为7.2-7.4，通过缓冲系统和调节co2含量，可维持正常ph。
开放培养要求5%co2环境、hepes(羟乙基哌/嗪乙硫磺酸）10-50mmol/ml可防止培养基的ph变化。含earle's缓冲系统的培养基适合于5%co2的培养条件，hank's缓冲系统的培养基仅含有0.35g/lnahco3，不能用于5%co2的环境，若放入co2培养箱，溶液将迅速变酸，使用时应注意。
（三）湿度和光
利用多孔细胞培养板、方瓶、培养皿等开放培养时，相对湿度应控制在95％以上。
动物细胞培养需避光，紫外线或可见光均可造成核黄素、酪氨酸、色氨酸等产生有毒的光产物，抑制细胞生长，降低其贴壁能力。
（四）影响细胞生长的其他因素
细胞接触橡胶用品，收集细胞时离心速度过大，细胞接种密度过低，细胞悬液或细胞培养物中气泡形成等，均对细胞不利，会导致细胞死亡或生长繁殖抑制。