pcr实验中常见问题汇总
问题及现象 原因 解决方案
1. pcr后，管中的液体较少。 样品挥发，损失 确保加热的盖子达到适当的温度。
吸取样本后，尽快盖上pcr管的盖子。防止挥发。
移液不准确 确保吸取20 µl引物混合物和5 µl lambda dna模板到pcr管中。样本量少时需要采用高精度移液器。
2.在quickstrip中没有足够的样本 quikstrip已变干。 加入40 μl水，在装载前轻轻上下移液以混合均匀。
3.电泳凝胶上看不到条带、对照dna和pcr产物 凝胶未正确制备。 确保正确稀释电泳缓冲液。
融化琼脂糖时需要特别注意较高浓度(>0.8%)的凝胶。在倒入凝胶之前，确保溶液 没有“团块”和玻璃状颗粒，也可以直接使用配置好的预制胶。省时省力。
凝胶未正确染色。 染色时注意浓度，实在不行就重新染色。
电泳装置或电源出现故障。 请联系电泳仪或电泳设备供应商，帮忙排除故障
4.凝胶染色后，dna条带模糊。 凝胶没有染色足够长的时间。 严格按照染色流程说明进行实验操作。
5.染色后，条带可见，但不存在pcr产物。 pcr扩增不成功。 注意引物设计是否合理，dna聚合酶的加入量是否适宜。
确保pcr的正确操作，温度设计是否合理。
6.染色后，凝胶上可见条带和对照pcr产物，其中一部分样品不存在。 pcr反应中添加了错误体积的dna和引物。 熟练使用移液器进行精准移液定量，确保移液的准确度