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肌氨酸氧化酶SOX酶学性质

2024/5/2 3:40:51发布12次查看
肌氨酸氧化酶(sarcosineoxidase,sox)酶学编号ec1.5.3.1,它是肌肉代谢产物肌酐的降解中的第三个酶,肌酐最终降解为*、甲醛和过氧化氢。在ivd领域sox被作为一种重要的诊断酶制剂。
肌氨酸氧化酶在体外诊断领域的应用是基于它的催化原理,可偶联肌酐酶(肌酐亚氨基水解酶)和肌酸酶(肌酸脒基水解酶crh)将肌酐降解为*、甲醛和过氧化氢。肌酐的水平是判断肾脏功能的一个重要参考指标,因此它在医药领域也具有良好的应用前景。
生化检测原料肌氨酸氧化酶
肌氨酸氧化酶的酶活:
以肌氨酸为底物,取50μl不同浓度的sox酶液,分别加人3ml显色液于1mmo1/l的4-氨基*、6mmo1/l的*、7000u/l的辣根过氧化物酶、20mmo1/l的tris-hc1缓冲液(ph8.0)中,混匀后加人150μl肌氨酸(0.2mo1/l),振荡混匀,于37℃水浴反应5min,结束后沸水浴煮沸3min终止反应,冷却,于500nm下测定吸光度。酶活单位定义为:在37℃下,每分钟转化1μmol肌氨酸产生甲醛所需的酶量定义为1个酶活单位(u)。
肌氨酸氧化酶的纯化:
从固体平板挑取单菌落,接人种子培养基,37℃培养过夜。按照体积分数5%的接种量接人发酵培养基,37℃,200r/min,培养至0d6000.6-0.8后,采用1mmo1/l的iptg诱导8h。菌液破壁离心后,取酶上清液进行纯化,纯化后的酶液置于4℃保存备用。
肌氨酸氧化酶的最适反应温度:
在ph8.0、20mmo1/ltris-hc1缓冲液体系中,在20-80℃范围内测定不同温度下的酶活力,观察温度对酶活性的影响,以确定酶的最适反应温度;
肌氨酸氧化酶的最适ph值:
在不同ph的反应体系(ph4.0-11.0)中测定s0x的酶活力,以酶活力高的记为100%,计算其他ph条件下的相对酶活力,确定酶促反应的最适ph。不同ph的缓冲液体系为柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(ph4.0-5.0),磷酸-磷酸钾缓冲液(ph6.0-7.0),tris-hc1缓冲液(ph8.0-9.0),*-na0h缓冲液(ph10.0-11.0)。
肌氨酸氧化酶可以与色原底物tops、过氧化物酶等试剂一起用于血清中肌酐水平的测定,德晟提供的有包括酶制剂括sox、crh,色原底物,缓冲剂等在内的多种试剂盒原料。
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