产品货号：ba1937
产品规格：100管/48样
产品简介：
α-l-阿拉伯呋喃糖苷酶（α-l-arabinofuranosidase，α-l-af）属于糖基水解酶家族，可以从含有阿拉伯糖残基的多聚物如阿拉伯木聚糖、阿拉伯聚糖和阿拉伯半乳聚糖等的非还原末端水解生成一个l-阿拉伯糖分子。该酶在半纤维素降解以及果实的成熟软化过程中有着重要作用。
α-l-af分解对硝基苯基-α-l-阿拉伯呋喃糖苷生成对-硝基苯酚，对-硝基苯酚在400nm处有最大吸收峰，通过测定400nm处吸光值变化可计算得α-l-af活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
产品组成：
试剂名称
规格
保存条件
提取液
液体100ml×1瓶
2-8℃
试剂一
粉剂×2支
-20℃
试剂二
液体35ml×1瓶
2-8℃
标准品
液体1ml×1支
2-8℃
溶液的配制：
1.试剂一：临用前取1支加入1.37ml蒸馏水，充分溶解，用不完的试剂建议分装后-20℃保存一周，避免反复冻融。
2.标准品：5µmol/ml的对-硝基苯酚。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、ep管。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1.组织：按照组织质量（g）:提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取0.1g组织，加入1ml提取液），冰浴匀浆。15000g，4℃离心10min，取上清（若为绿色植物的茎、叶、芽等组织，建议将上清用提取液稀释5倍后检测；若为果肉等组织，上清可直接检测或根据预测定结果稀释相应倍数后检测）置冰上待测。
2.细菌、细胞：先收集细胞或细菌样本到离心管内，离心弃上清后，按照细胞数量104个：提取液体积（ml） 500~1000:1的比例，建议500万细胞加入1ml提取液），冰浴超声波破碎细胞或细菌（功率200w，超声3s，间隔7s，总时间3min），然后15000g，4℃，离心10min，取上清，置冰上待测。
3.液体：直接测定。
二、测定步骤
1.分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至400nm，蒸馏水调零。
2.将5µmol/ml的对-硝基苯酚标准液用提取液稀释为500、250、125、62.5、31.25、15.625nmol/ml的标准溶液备用。
3.操作表 (在1.5ml离心管中) ：
试剂名称（μl）
对照管
测定管
标准管
空白管
试剂一
-
40
-
-
蒸馏水
40
-
40
100
样本
60
60
-
-
标准溶液
-
-
60
-
混匀，37℃水浴或恒温培养箱中准确反应30min
试剂二
200
200
200
200
混匀，吸取200µl于微量玻璃比色皿或96孔板中，测定400nm处吸光值a，分别记为a 对照管、a测定管、a标准管、a空白管。计算δa=a测定管-a对照管，δa标准=a标准管-a空白管。每个测定管需设一个对照管，标准曲线只需检测1-2次。
三、α-l-af活性计算
1.标准曲线的绘制：
以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的δa标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y＝kx+b，将δa带入方程得到x（nmol/ml）。
2.α-l-af 活性的计算：
（1）按蛋白浓度计算
酶活定义：每mg蛋白每小时产生1nmol对-硝基苯酚为1个酶活力单位。
α-l-af酶活（u/mg prot）= x×v提取÷（v提取×cpr）÷t=2x÷cpr
（2）按样本质量计算
酶活定义：每g样本每小时产生1nmol对-硝基苯酚为1个酶活力单位。
α-l-af酶活（u/g质量）= x×v提取÷w÷t= 2x÷w
（3）按照细胞或细菌数量计算
酶活定义：每104个细胞每小时产生1nmol对-硝基苯酚为1个酶活力单位。
α-l-af 酶活（u/104 cell）= x×v提取÷细胞数量（万个）÷t= 2x÷细胞数量（万个）
（4）按液体体积计算
酶活定义：每ml样本每小时产生1nmol对-硝基苯酚为1个酶活力单位。
α-l-af 酶活（u/ml）=x×v样÷v样÷t=2x
v提取：提取液体积，1ml；v样：加入的样本体积，0.06ml；cpr：样本蛋白浓度，mg/ml，蛋白浓度自行测定；w：样本质量，g；t：反应时间，0.5h。
注意事项：
1.a或δa大于1.2时，建议将样本用提取液稀释后再进行测定。
2.正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定，若浓度过高，建议将样本用提取液稀释适当倍数后再进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数；若浓度过低，建议在样本提取时增加组织质量。
3.加入试剂二后，建议5min内读取od值。