反相高效液相色谱柱由于其分离效率高、选择性好，检测灵敏度高，操作自动化，应用范围广等特点成为广大分析工作者的优选分析方法。流动相承担液相分离作用的重要作用，是液相色谱柱系统的大脑。能否选择合适的流动相，影响整个分析工作的质量。掌握流动相选择的理论知识对于分析工作者特别是药物分析工作者是非常必要的。选择用于分析的合适的流动相是一件难以确定和非常困难的任务。虽然没有有关流动相选择的简易技巧、捷径、窍门或秘诀，但却有些理论来简化此过程，反相高效液相色谱流动相一般是由水相和有机相组成。
反相高效液相色谱柱的物理性质：
硅胶纯度：硅胶纯度对强极性化合物的分离较为重要，残留金属离子浓度、硅胶的杂质会影响化合物的峰形，硅胶表面的金属含量高会影响碱性化合物的峰形，易发生拖尾。
a型硅胶是由金属硅酸盐制备而来，具有很高的金属含量，硅胶纯度较低，可用作中性化合物和非离子化合物的分离。
b型硅胶是以无金属的工艺制备而来，纯度高、酸性较弱、只含有微量的金属，可用于分离离子化合物、可电离化合物，特别是碱性化合物。
现在的色谱柱填料以b型硅胶为主，但是不同品牌、不同类型的色谱柱的硅胶表面金属含量还是略有差别的，如果色谱峰形较差，需要关注不同品牌色谱柱的硅胶纯度。
色谱柱尺寸：增加色谱柱长度，可以在一定程度上提高柱效，但也会升高压力和导致峰展宽；宽柱径，提高载样量，但也会增加横向扩散，同样会导致峰展宽。窄柱径可以节约溶剂，可减少横向扩散，但压力较大，对系统要求较高。