脂质体介导dna转染技术分析
脂质体介导是目前条件下z方便的转染方法之一，适用于把dna转染入悬浮或贴壁培养细胞中，其转染率高，优于磷酸钙法，比它高5～100倍，能把dna和rna转染到各种细胞株。
用lr进行转染时，首先需优化转染条件，应找出该批lr对转染某一特定细胞适合的用量、作用时间等，对每批lr都要做：*，先要固定一个dna的量和dna/lr混合物与细胞相互作用的时间，dna可从1～5μg和孵育时间6小时开始，按这两个参数绘出相应lr需用量的曲线，再选用lr和dna两者的剂量，确定出转染时间(2～24小时)。因lr对细胞有一定的毒性，转染时间以不超过24小时为宜。
方法一、操作步骤
1. 取6孔培养板(或用35mm培养皿)，向每孔中加入2ml含1～2×105 个液，37℃co2 培养至40%～60%汇合时(汇合过分，转染后不利筛选细胞)。
2. 转染液制备：在聚苯乙稀管中制备以下两液(为转染每一个孔细胞所用的量)a液：用不含血清培养基稀释1-10μg dna，终量100μl，b液：用不含血清培养基稀释2-50μglr，终量100μl，轻轻混合a、b液，室温中置10-15分钟，稍后会出现微浊现象，但并不妨碍转染(如出现沉淀可能因lr或dna浓度过高所致，应酌情减量)。
3. 转染准备：用2ml不含血清培养液漂洗两次，再加入1ml不含血清培养液。
4. 转染：把a/b复合物缓缓加入培养液中，摇匀，37℃温箱置6～24小时，吸除无血清转染液，换入正常培养液继续培养。
5. 其余处理如观察、筛选、检测等与其它转染法相同。
注意：转染时切勿加血清，血清对转染效率有很大影响。
方法二、快速脂质体转染法
1. 以5×105 细胞株/孔接种6孔板(或35mm培养皿)培养24小时，使其达到50～60%板底面积。
2. 在试管中配制dna/脂质体复合物方法如下：
①在1ml无血清dmem中稀释psv2-neo质粒dna或供体dna。
②旋转1秒钟，再加入脂质体悬液，旋转。
③室温下放置5～10分钟，使dna结合在脂质体上。
3. 弃去细胞中的旧液，用1ml无血清dmem洗细胞一次后弃去，向每孔中直接加入1ml dna/脂质体复合物，37℃培养3～5小时。
4. 再于每孔中加入20%fcs的dmem，继续培养14～24小时，
5. 吸出dmem/dna/脂质体混合物加入新鲜10%fcs的dmem，2ml/孔，再培养24～48小时。
6. 用细胞刮或消化法收集细胞，以备分析鉴定。
方法三、稳定的脂质体转染
1. 接种细胞同前，细胞长至50%板底面积可用于转染。
2. dna/脂质体复合物制备转染细胞同前2、3步骤。
3. 在每孔中加入1ml、20%fcs的dmem，37℃培养48小时。
4. 吸出dmem，用g418选择培养液稀释细胞株，使细胞生长一定时间，筛选转染克隆，方法参照细胞筛选法进行。