简 介
1975年，porath等人提出了一种新的纯化方法-固定化金属鳌合层析，利用金属离子（ni2+，cu2+等）与氨基酸表面的残基（如*的咪唑基）的配位鳌合作用，来纯化与金属离子有亲和作用的蛋白质。
*标签由于分子量小，几乎不干扰靶蛋白的功能、活性和结构而被广泛的使用。固定的金属离子亲和层析是纯化*标签蛋白的常用方法。
*标签蛋白的纯化工具
月旭ni亲和填料ni tanrose 6ff（nta）
ni tanrose 6ff（nta）亲和介质是将金属离子ni2+鳌合在以氨三乙酸为配基的6%高度交联的琼脂糖凝胶上形成的亲和层析介质。月旭科技研发的ni tanrose 6ff（nta）不仅纯化纯度较高，通过控制合理的ni离子密度，结合载量可达到～40mghis标签蛋白/ml介质，可以用于各种表达来源（如大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞）的*标签（6xhis-tagged）蛋白的纯化。nta含有四个螯合区，较一般的三齿螯合剂能更好的结合ni2+。6xhis可与ni2+螯合，从而使his标签蛋白结合在ni tanrose 6ff（nta）纯化介质上，未结合的蛋白被洗涤下去，结合在介质上的蛋白经过一定浓度的咪唑或低ph缓冲液被温和的洗脱下来，从而得到高纯度的目标蛋白。具有载量高、选择性好、易于再生、成本低等优点。有了它，再也不用担心完不成纯化任务了。
precot ni 6ff（nta）是ni tanrose 6ff（nta）的1ml和5ml预装柱，用来纯化6xhis-tagged蛋白，可以使用注射器、蠕动泵，或者液相层析系统（例如akta或fplc）。
ni tanrose 6ff（nta）应用案例
预装柱：precot ni 6ff（nta） 5ml
样品：含有his标签蛋白（大肠杆菌表达）
平衡液a：50mm tris-hcl，0.5m nacl,20mm咪唑ph8.0
洗脱液b：50mm tris-hcl，0.5m nacl，0.5m 咪唑，ph8.0
流速：平衡、洗脱-1.0ml/min上样-0.5ml/min
precot ni 6ff（nta）纯化his标签蛋白的纯化色谱图
1：原液
2：流穿
3：洗脱（100%b）
4：原液
5：流穿
6：洗脱（100%b）
备注：1-3（样品和平衡液中不含咪唑）；4-6（样品和平衡液中含20mm咪唑）
由于宿主蛋白中也存在*和/或半*氨基酸残基，其他的非特异性蛋白与靶蛋白一起与金属离子亲和层析填料结合，造成纯化样品纯度不高。提高样品中的咪唑浓度，*标签蛋白通过ni tanrose 6ff（nta），可以一步纯化得到85%以上纯度的纯化样品。