1 材料与方法
1.1 试剂与仪器
biotage express abn 固相萃取柱 （60mg/3ml）；absciex qtrap 6500 液相色谱 质谱联用仪，美国 ab 公司；全自动固相萃取仪（拜泰齐贸易上海有限公司）；5430r 离心机，德国 eppendorf 公司；vortex-5 涡旋混合器，海门其林贝尔公司；微量移液器，德国 eppendorf。 diclazepam(1.0mg/ml)、（1.0mg/ml)、7- 氨基（1.0mg/ml)、*（1.0mg/ml)、 （1.0mg/ml)、 扎 来 普 隆（1.0mg/ml)、 佐 匹 克 隆（1.0mg/ml)、 （1.0mg/ml)、 *（100µg/ml)、氯（1.0mg/ml) 和 diazepam-d5（100µg/ml)（均购自上海安谱科学仪 器有限公司）。
1.2 溶液配制
精密移取各对照品及内标（diazepam-d5）适量， 分别以甲醇配制成各对照品浓度均为 10μg/ml 的混 合标准溶液和 0.2μg/ml 的内标工作液。
1.3 血液样品处理
精密移取全血样品 1ml，加入 50ngdiazepam-d5， 混匀，过固相萃取小柱（abn 柱），再加入 2ml 水 洗脱，固相萃取小柱尽量吹干后，用1ml甲醇洗脱（除 步取血 1ml 外，后续过程由全自动固相萃取仪 完成），取洗脱液 5μl 供 lc-ms/ms 分析。
1.4 色谱及质谱条件
色谱条件 色谱柱：kinetex 2.6µc18(50m×3.0mm)； 柱温：30℃；流速：0.4ml/min；进样量：5µl；流 动相 a：10mmol/l 甲酸铵水溶液；流动相 b：乙 腈； 梯 度 洗 脱 程 序：0~1min，98% a；1~10min，98%~0%a；10~13min，0% a；13~13.1min，0%~98% a； 13.1~15.5min，98% a。
2 结果
2.1 方法的专属性
取空白全血添加混合标准溶液，配制成 100ng/ ml 的添加血。按 1.3 方法进行样品处理，按 1.4 的 色谱和质谱条件进行分析，得到 10 种及内标 的总离子流图，见图 1，同时选取了部分的 mrm 图，见图 2。结果表明该方法可将 10 种及内标较好的进行分离，药物相互之间不影响测 定。
2.2 工作曲线和检测限
取空白全血添加混合标准溶液，分别配制成 0.1、0.2、0.5、1、2、5、10、25、50、100、250 和 500ng/ml 的添加血。按 1.3 方法进行样品处理，按 1.4 的色谱和质谱条件进行分析，根据各种的 保留时间和碎片离子定性，以色谱峰面积进行定量， 以信噪比 s/n≥3 作为检出限，以信噪比 s/n≥10 作 为定量限，以各被测物浓度为横坐标，以被测 物与内标峰面积比值为纵坐标，进行加权（w=1/x） 最小二乘法回归运算。
3 讨论
十种中，、、7- 氨基 都属于第三代镇静，结构比较相似， 保留时间比较接近，为了能使十种能够* 分离，综合分离度、峰形等相关因素，选择梯度洗 脱程序进行方法研究。十种都含有氮原子，在电喷雾离子源（esi）电离下氮原子易得到一个质 子，形成 [m+h]+ 离子态。因此由理论分析可知在 esi+ 离子化模式下进行全扫描比在 esi- 离子模式 下灵敏度更高，因此采用电喷雾离子源（esi）正离 子模式。在电喷雾离子源（esi）电离下氮原子易得到一个质 子，形成 [m+h]+ 离子态。因此由理论分析可知在 esi+ 离子化模式下进行全扫描比在 esi- 离子模式 下灵敏度更高，因此采用电喷雾离子源（esi）正离 子模式。
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