大肠杆菌o157:h7是肠出血性大肠杆菌中的代表种类，在世界范围内多次爆发，造成了重大的经济损失，因此，该菌在食品安全等方面具有重要的研究意义。本文缔一生物为您介绍常规培养法检测大肠埃希氏菌o157：h7/nm操作步骤如下：
1增菌
以无菌操作取检样25g(或25ml)加入到含有225ml mec+新生霉素肉汤的均质袋中，在拍击式均质器上连续均质1min~2min;或放入盛有225ml mec+新生霉素肉汤的均质杯中，8000r/min~10000r/min均质1min~2min。36℃±1℃培养18h~24h。
2分离
取增菌后的mec+n肉汤，划线接种于ct-smac平板和大肠埃希氏菌o157显色琼脂平板上，36℃±1℃培养18h~24h，观察菌落形态。在ct-smac平板上，典型菌落为圆形、光滑、较小的无色菌落，中心呈现较暗的灰褐色;在大肠埃希氏菌o157显色琼脂平板上的菌落特征按产品说明书进行判定。
缔一生物为您*一款ct-smac平板，上himedia公司生产的，大肠杆菌o157：h7显色培养基（货号：m1340），又名为麦康凯*培养基，是用于从食物和动物饲料中选择性分离大肠杆菌o157:h7。培养基中含有*。大肠菌群如肺盐克雷伯菌发酵*，产生粉红色菌落，大肠杆菌o157:h7不发酵*，为无色菌落。普通大肠杆菌则被鉴别为蓝绿色，大多数革兰氏阳性菌被结晶紫和胆盐抑制。
本品还有化学限定培养基可选，有效避免患疯牛病的风险。符合国标gb4789.36—2016大肠埃希氏菌o157:h7/nm检验ct-smac平板试剂规定。himedia公司生产的培养基生产均通过了iso9001、iso13485、who-gmp认证和ce认证，产品质量有保障。
3初步生化试验
在ct-smac和大肠埃希氏菌o157显色琼脂平板上分别挑取5个~10个可疑菌落，分别接种tsi琼脂，同时接种mug-lst肉汤，并用大肠埃希氏菌株(atcc25922或等效标准菌株)做阳性对照和大肠埃希氏菌o157:h7(nctc12900或等效标准菌株)做阴性对照，于36℃±1℃培养18h~24h。必要时进行氧化酶试验和革兰氏染色。
在tsi琼脂中，典型菌株为斜面与底层均呈黄色，产气或不产气，不产生硫化氢(h2s)。置mug-lst肉汤管于长波紫外灯下观察，mug阳性的大肠埃希氏菌株应有荧光产生，mug阴性的应无荧光产生，大肠埃希氏菌o157:h7/nm为mug试验阴性，无荧光。挑取可疑菌落，在营养琼脂平板上分纯，于36℃±1℃培养18h~24h，并进行下列鉴定。
4鉴定
4.1血清学试验
在营养琼脂平板上挑取分纯的菌落，用o157和h7诊断血清或o157乳胶凝集试剂作玻片凝集试验。对于h7因子血清不凝集者，应穿刺接种半固体琼脂，检查动力，经连续传代3次，动力试验均阴性，确定为无动力株。如使用不同公司生产的诊断血清或乳胶凝集试剂，应按照产品说明书进行。
4.2生化试验
4.2.1自营养琼脂平板上挑取菌落，进行生化试验。大肠埃希氏菌o157:h7/nm生化反应特征见表1。
4.2.2如选择生化鉴定试剂盒或微生物鉴定系统，应从营养琼脂平板上挑取菌落，用稀释液制备成浊度适当的菌悬液，使用生化鉴定试剂盒或微生物鉴定系统进行鉴定。
4.3毒力基因测定(可选项目)
样品中检出大肠埃希氏菌o157:h7或o157:nm时，如需要进一步检测vero细胞毒素基因的存在，可通过接种vero细胞或hela细胞，观察细胞病变进行判定;也可使用基因探针检测或聚合酶链反应(pcr)方法进行志贺毒素基因(stx1、stx2)、eae、hly等基因的检测。如使用试剂盒检测上述基因，应按照产品的说明书进行。
himedia公司检测大肠埃希氏菌o157：h7/nm可用产品：
用途
品名
货号
增菌
改良 ec 肉汤
m1285
增菌
新生霉素（加入改良ec肉汤）
fd096
选择性分离
ct-smac 平板（hicrome macconkey sorbitol agar base+添加剂）
m1340，fd147
选择性分离
大肠埃希氏菌o157显色琼脂平板（添加剂）
mv157，fd187
初步生化试验
三糖铁琼脂
mv021
初步生化试验
mug-lst肉汤
mv1046
纯培养
营养琼脂
mv877
血清学鉴定
o157乳胶凝集试验
lk13-50no
生化鉴定
hie.coli 生化鉴定试剂盒
kb010
缔一生物作为himedia公司在中国的代理商，在微生物培养和检测领域，一如既往地为您带来的服务。