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OptiVitro® T细胞无血清培养基介绍

2024/4/19 15:41:25发布3次查看
optivitro® t细胞无血清培养基✓ 无血清,无异种成分,无外源生长因子✓ 支持t细胞的快速增殖和高密度培养,可用于大规模工艺流程✓ 提供瓶装&袋装两种形式,便于生产规模扩大和商业化开发✓ 适合于多种激活方法,可支持较长周期的稳定培养(>14天)✓ 自主研发,供货稳定,可提供定制化服务(配方优化等)✓ 按照gmp标准生产和管理, 完成fda dmf备案
应用:适合用于扩增人外周血单个核细胞(pbmc)中的 t 细胞,也适合于 t 细胞的重激活扩增培养。应用于t细胞疗法开发,如car-t、tcr-t、til等。
常见问题
1. 组分:本产品每1l基础培养基配发8ml添加组分,添加组分不是icsr或者血替,化学成分明确,可放心使用,必须配成全培养基后再使用;——可以提供成分说明及tse/bse的申明。2. t细胞激活方式:使用本产品,可根据说明书用抗体包板方式进行激活,也可购买商业抗体偶联磁珠进行激活,本产品同样支持磁珠激活。3. 活率:直接培养pbmc,d5后活率可达90%以上,从pbmc中分选出t细胞,则d3开始活率可达到90%以上,d7后活率均可达到95%以上;如果转导car,转导当天活率显著下降,为正常现象,继续培养活率会持续上升。4. 培养方式:使用本产品,比较推荐的培养方式是d0天激活,d3、d5、d7补充培养液将细胞密度调整到0.5-1x10^6cells/ml,d7后可选择2天或3天补一次液。5. t细胞扩增速度:t细胞的扩增在d3-d9速度较快,基本平稳,d9细胞扩增倍数一般可以达到200倍以上。d9后细胞扩增速度逐渐减缓,激活pbmc中的t细胞,最多可培养20天。6. 高密度培养:静置培养,密度可达5-6x10^6 cells/ml,摇瓶培养或其他震荡培养方式,密度可达10x10^6 cells/ml以上。7. cd4/cd8比例调节:使用本产品并且用磁珠激活,cd4比例较高,用抗体包板激活则cd8比例较高,可以通过改变激活方式、改变抗体包板浓度,调节cd4/cd8比例。8. t细胞亚型分群:tn为初始t细胞,tcm为中央记忆型t细胞,tem为激活的tcm,tef为效应t细胞,分群比例随着细胞培养的时间而变化。不同客户对分群的要求可能不同,且不同激活方式、细胞因子的选择以及浓度,对分群影响很大,建议客户自行测试。9. t细胞转导:根据客户反馈测试数据,本产品阳性率可达到50%左右,但是不同客户使用的工艺不同,可能导致阳性率有变化。car慢病毒转导,可使用polybrene辅助转导,逆转录病毒转导可使用retronectin辅助转导,也有许多新型辅助因子可提高转导效率;采用离心转导的方式可提高转导效率。10. t细胞生物反应器培养:静置培养后d5-d7开始在反应器中培养,在达到目标体积之前,可以2-3天补液细胞密度调整到0.5-1x10^6 cells/ml,到达目标体积后可以采取部分灌流策略。
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