邻单胞菌通用lamp试剂盒反应液的配制:
pcr反应体系的配置方式有时也会影响反应的正常进行。常规方法与其它酶学反应一样,在后加入dna聚合酶。早期的pcr仪没有带加热的盖子,要求在反应液上覆盖一层矿物油,防止水分蒸发。
对于使用具3’-5’外切活性的高温dna聚合酶时,有时会扩增不出产物。在遇到这个问题时,如果将反应成分分开配制,a管含模板、引物和dntp,以及调整体积的h2o,b管含缓冲液、dna聚合酶和水,然后再将两管溶液混合起来,可较好地克服这个问题。
按照常规的方法配制反应体系,有时会出现非特异性扩增的问题。热启动(hotstart)pcr操作方式可较好解决这一问题。将dntp、缓冲液,mg2+和primer先配制好,然后加入一粒蜡珠(如ampliwaxpcrqam100),加热熔化,再冷却,使蜡将溶液封住,后加入模板和dna聚合酶等剩余成分。只有当pcr反应进入高温阶段后,蜡层熔化,所有反应成分才会混合在一起。
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