紫草属皮肤科要药，临床上紫草油被广泛用于 各类血热蕴毒型皮肤创面。我国存在多种紫草制 剂，其中*( 国药准字 z) 为目前 的国药准字紫草油之制剂，临床多用于烧烫伤、 尿布皮炎等病。该药以麻油为基质，主要组成包括 紫草、白芷、忍冬藤、*。以上组分中，*的抑菌 作用研究相对完备，体外抑菌实验证实，*对变形 杆菌、*等均具有较好的抑制效果，但*在*中浓度不超过 2. 5% ，目前尚 缺乏对其余三味主要成分的抑菌特点研究。另外， 因*属油剂，与抑菌实验中菌平板的水相 基质相斥，用常规直接打孔法无法体现抑菌结果，目 前*的抑菌特点尚未研明。
1 成分单药对*抑菌实验
1. 1 材料
1. 1. 1 微生物
* atcc29213 菌种 纯培养物; 培养基按照常规方法制作。
1. 1. 2 药物
紫草、白芷、忍冬藤饮片制成的 100 目细粉( 健民药业提供) 。
1. 1. 3 试剂与仪器
乙醇( 95%、75%、50%、25%、 15% v/v 浓度) ，蒸馏水，生理盐水，营养琼脂培养基 ( 北京奥博星生物技术有限公司，批号 ) ，琼 脂粉 ( 北京奥博星生物技术有限公司，批 号 ) 。索式回流提取装置( 杭州聚同 jtxt250s) 、涡旋振荡器( 其林贝尔 01-861)、循环水式多用真空泵( 郑州长城 shb-iii) 、旋 转蒸发仪( 郑州长城 ｒ-1001-vn) 、一次性塑料平板 ( 预灭菌) ，不锈钢涂布棒，接种环，打孔器，微量移 液器( 5 ～ 10 μl) ，托盘天平，量筒，游标卡尺等。
1. 2 方法
1. 2. 1 药液制备
按流程制备紫草、白芷、忍冬藤 不同浓度醇提液及水煎液，具体方法如下: 1) 乙醇回 流提取法: 分别取紫草、白芷、忍冬藤粉剂 25 g，以 8 倍量 95% 乙醇浸泡 30 min 后，75 ℃ 加热回流提取 1 h，滤过; 在剩余药粉中加入 6 倍量 95% 乙醇继续 回流 1 h，滤过。合并两次回流提取后所得滤液，以 旋转蒸发仪缓慢回收乙醇，剩余液体加入蒸馏水稀 释至 8 倍量( 每毫升含药量相当于生药 0. 125 g) ，进 行封装。依照上述方法，将乙醇浓度分别置换为 75% 、50% 、25% 、15% ，并取得相应的药液。2) 乙醇 浸泡提取法: 分别取紫草、白芷、忍冬藤粉剂 25 g，加 入 8 倍量 95% 乙醇浸泡 48 h 后，滤过，弃去剩余药 粉，以旋转蒸发仪缓慢回收乙醇，剩余液体加入蒸馏 水稀 释 至 8 倍 量 ( 每毫升含药量相当于生药 0. 125 g) ，进行封装。3) 水煎提取法: 分别取紫草、 白芷、忍冬藤粉剂 25 g，加入 8 倍量蒸馏水浸泡 30 min 后，煎煮 1 h，静置降温沉淀后滤过封装( 每毫升 含药量相当于生药 0. 125 g) 。完成上述全部流程， 即制得 21 种不同药液，分别标记并放入 4 ℃ 冰箱保 存备用。
1. 2. 2 平板打孔法抑菌实验
取妥善保藏的*菌种，37 ℃ 无菌条件下培养 18 ～ 24 h，得指数生长期菌样本，4 ℃ 冰箱保存。在小试管中 倒入 2 ml 生理盐水，将接种环灭菌后，取一定量菌 样本与生理盐水配成 108 cfu /ml 菌悬液。调制灭 菌培养基并倒入一次性塑料培养皿中，每培养皿 10 ml，紫外照射冷却后，使用微量移液器将 100 μl 菌悬液 加 入 平 板，涂 布 均 匀。用 外 径 为 ( 5. 52 ± 0. 31) mm 的打孔器( 预灭菌) 对菌平板进行打孔，每 板 4 孔。孔间距不少于 25 mm，孔中心距平皿边缘 不少于 15 mm。取一种药液，在菌平板的 3 个孔中 分别加入 50 μl 药液，剩余 1 孔中加 50 μl 无菌生 理盐水做为对照。37 ℃ 恒温培育 24 h。选择均匀 而*无菌生长的抑菌环，以游标卡尺测量抑菌圈 直径。计算平均值。
1. 3 结果
药液经培养基中的琼脂扩散自然形成 不同浓度梯度，可以凭抑菌环的大小显示不同药液 的抑菌作用强弱。在相同质量药物的提取物中，紫 草回流提取时使用的乙醇浓度与相应提取物的抑菌 效果呈正相关，说明紫草主要抑菌成分在有机相中 的溶解度高于水相; 而紫草水煎提取物抑菌能力优 于 15% 乙醇回流提取物，提示紫草水煎液中抑菌有 效成分或与醇提液中抑菌有效成分不同。不同提取 方法所得白芷提取物间抑菌效果差异不显著，说明 白芷抑菌成分在有机相和水相的溶解度接近，对热 的稳定性较好。忍冬藤回流提取时使用的乙醇浓度 与其相应提取物抑菌效果呈负相关，使用 95% 乙醇 浸泡法及水煎法所获提取物抑菌效果均显著优于 95% 乙醇加热回流法提取物，说明抑菌成分在水相 中的溶解度高于有机相，长时间受热易分解。
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