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人窖蛋白(Cav-1)免疫组化试剂盒​实验步骤

2024/4/18 22:01:19发布2次查看
人窖蛋白(cav-1)免疫组化试剂盒实验步骤(建议方案):
1.烤片: 将待做切片置于切片架上,于60℃恒温烤箱中至少烤1 hr;
2.脱蜡: 切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡3 次(即二甲苯ⅰ、ⅱ、ⅲ),每次10 min;
3.水化: 切片经下行酒精水化,无水乙醇5min,95%乙醇2 次(每次2min),85%
乙醇2 min;75%乙醇2min,自来水冲洗,ddh2o 洗2×2min;
4.抗原修复: 根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复,常采用高压、微波(温度达到98~100℃)或酶消化修复法,室温自然冷却,自来水冲洗,ddh2o 洗2×2min,tbs 洗涤(2×2min)(具体修复方法见附1)* 注:有些抗原勿需修复,直接进入第5 步封闭。
5.封闭: 滴加试剂b,37℃湿盒孵育30 min;
6.加一抗:滴加用试剂c(即用型一抗),37℃湿盒孵育2 hr 或4℃过夜;
7.洗涤: tbs-t 洗涤(3×5 min);
8.封闭: 滴加试剂b,37℃湿盒孵育10 min;
9.加二抗: 滴加用抗体稀释液稀释的*化二抗(试剂d),37℃湿盒中孵育30 min;
10.洗涤: tbs-t 洗涤(3×5 min);
11.封闭: 滴加试剂tween 20,37℃湿盒孵育封闭20 min;
12.加hrp-sa: 滴加用抗体稀释液稀释的试剂e(1:50~200,终浓度5~20 nm),37℃湿盒中孵育30 min;
13.洗涤: tbs-t 洗涤(3×5 min),tbs 洗涤(2×5 min);
14.显色:应用dab 溶液(试剂f)显色;
15.复染:自来水充分冲洗,复染,脱水,透明;
16.封片: 待组织标本干后,用试剂缓冲甘油封固剂封片;
17.观察成像: 显微镜下观察成像。
(2np-amoz)呋喃它酮代谢物单克隆抗体
(2np-sem)*酮代谢物单克隆抗体
(2np-ahd)*代谢物单克隆抗体
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