大鼠elisa酶联免疫试剂盒实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠热休克60(hsp-60)。用纯化的大鼠热休克克60(hsp-60)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入热休60(hsp-60)，再与 hrp标记的热休克60(hsp-60)抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物 tmb显色。tmb在hrp酶的催化下转化成蓝色，并60(hsp-60)呈正相关。在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的热休克用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度（od值），通过标准曲线计算样品中大鼠热休克60(hsp-60)浓度。
标本要
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含nan3的样品，因 nan3抑制辣根过（hrp）活性。
操作步骤大鼠热休克60(hsp-60)酶联免疫分析试剂盒
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl（样品zui终稀释度为 5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
温育：用封板膜封板后37℃温育30分钟。20倍稀释后备用
配液：将 20倍浓
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静重复 5次，拍干。30秒后弃去，如此
加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。
温育：操作同 3。
洗涤：操作同 5。
显色：每孔先加入显色剂 a50μl，再加入显色剂 b50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.
10.终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（od 值）。测定应在加终止液后 15分钟以内进行。
操作程序总：
计算以标准物的浓度为横坐标， od值为纵坐标，在坐标纸上，根据样品的od值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 od值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 od值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项大鼠热休克60(hsp-60)酶联免疫分析试剂盒
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有析出，稀释时可在浴中加温助溶，洗涤时不影响。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在 5分钟内，如标本数量多，*使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 od值大于标准品孔*孔的 od值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验。
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月