产品货号:r23272
产品规格:4×50ml
产品简介:
三磷酸腺苷酶( adenosine triphosphatase,atpase)是一种水解酶,是催化atp分解产生能量的一种酶,根据所用激活剂、抑制剂以及酶定位的不同分为膜性三磷酸腺苷酶、肌球蛋白三磷酸腺苷酶、线粒体三磷酸腺苷酶等。肌球蛋白三磷酸腺苷酶(myosin atpase)最适ph为9.2~9.4,被钙离子激活而被镁离子抑制。它分解atp时所产生的能量供肌肉收缩之用。此酶定位于骨骼肌,常用来区分两型肌纤维。i型肌纤维又称红肌,是慢纤维,即肌纤维的收缩较慢而活动持久,其酶活性高,染色深;ii型肌纤维又称白肌,是快纤维,即肌纤维的收缩快,但活动不持久,其酶活性低,染色淡。atpase水解atp反应如下:
a-p-p-p + h2o→a-p-p + h3po4+能量
肌纤维atpase染色液(钙激活法)的原理是atpase水解atp为adp和磷酸,磷酸与钙离子在酶活性部位结合形成无色的磷酸钙沉淀,磷酸钙经氯化钴处理形成磷酸钴,再经硫化液处理便形成棕黑色的硫化钴沉淀在酶活性部位。此酶利用酸或碱做前孵育处理,用碱做前孵育处理时,仅白肌纤维出现阳性反应,这对肌球蛋白atpase是特异性的;用酸做前孵育处理时,红肌纤维首先倍染色。因此钙激活法的atpase染色主要用来区分红肌和白肌,这对神经性肌wei缩和肌源性肌wei缩的诊断有一定价值。本产品仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
产品组成:
产品组成
4×50ml
保存条件
试剂(a): 酸性孵育液
50ml
4℃
试剂(b): 碱性孵育液
50ml
4℃
试剂(c):
atpase孵育液
试剂(c1): atpase孵育液a
25ml
4℃
试剂(c2): atpase孵育液b
25ml
4℃
试剂(d): atpase钴溶液
50ml
4℃ 避光
试剂(e): atpase硫化溶液
2×1ml
4℃ 避光
需自备的仪器和用品:
骨骼肌等组织的冰冻切片、水浴锅或恒温箱、蒸馏水、梯度乙醇、中性树胶、二甲苯或环保浸蜡脱蜡透明液。
操作步骤 (仅供参考) :
1.取新鲜组织,低温恒冷冰冻切片(用液氮快速冷冻效果更佳),厚度6μm,连续切片贴于玻片上,分别命名为a片、b片,切片不需要固定。
2.配制atpase孵育液:atpase孵育液a和atpase孵育液b等比例混合即可,ph应为9.3~9.5,即配即用。
3.配制atpase硫化工作液:atpase硫化溶液用蒸馏水稀释50~100倍即可,即配即用。
4.酸性孵育液、碱性孵育液和atpase孵育液使用前应提前37℃孵育10min。
5.a片浸入酸性孵育液,37℃孵育5min,水冲洗5s,再浸入碱性孵育液37℃孵育30s,水冲洗5s。
6.取b片浸入碱性孵育液,37℃孵育15min,水冲洗5s。
7.将a片和b片浸入atpase孵育液,37℃孵育30~60min,水冲洗5s。
8.入atpase钴溶液孵育3min,水冲洗5s。
9.切片入硫化工作液,孵育30~60s,水冲洗30s。
10.常规脱水透明,中性树胶封固。
染色结果:atpase主要呈黑色或棕黑色。
肌纤维类型
酸性孵育液
碱性孵育液
i(红肌)
深
淡
iia(白肌)
淡
深
iib(白肌)
中度
深
注意事项:
1.三磷酸腺苷酶经固定后活性大受影响,因此切片不经固定。
2.atpase孵育液经混合后ph接近9.4,此时比较适宜酶的染色,如有条件,应测定并调整ph合格后再使用。如果ph偏离很大或出现沉淀都可能导致染色失败,应即配即用。
3.atpase硫化液有腐蚀性和刺激性气味,应小心操作。每次用过后应拧紧盖子,否则容易挥发失效。配制硫化工作液时应在通风橱内操作。
4.atpase硫化工作液配后不久自行分解而失效,应每次小量配制。
5.冰冻切片染色时,应减少切片在室温暴露的时间。
6.染色效果与酸性孵育液、碱性孵育液、atpase孵育液的ph变化有很大关系,尽量减少改变ph的因素,如避免反复开盖、避免室温放置过久等。
7.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期: 6个月有效。4℃运输,4℃保存。