产品货号：r23272
产品规格：4×50ml
产品简介：
三磷酸腺苷酶( adenosine triphosphatase，atpase)是一种水解酶，是催化atp分解产生能量的一种酶，根据所用激活剂、抑制剂以及酶定位的不同分为膜性三磷酸腺苷酶、肌球蛋白三磷酸腺苷酶、线粒体三磷酸腺苷酶等。肌球蛋白三磷酸腺苷酶(myosin atpase)最适ph为9.2~9.4，被钙离子激活而被镁离子抑制。它分解atp时所产生的能量供肌肉收缩之用。此酶定位于骨骼肌，常用来区分两型肌纤维。i型肌纤维又称红肌，是慢纤维，即肌纤维的收缩较慢而活动持久，其酶活性高，染色深；ii型肌纤维又称白肌，是快纤维，即肌纤维的收缩快，但活动不持久，其酶活性低，染色淡。atpase水解atp反应如下：
a-p-p-p + h2o→a-p-p + h3po4+能量
肌纤维atpase染色液(钙激活法)的原理是atpase水解atp为adp和磷酸，磷酸与钙离子在酶活性部位结合形成无色的磷酸钙沉淀，磷酸钙经氯化钴处理形成磷酸钴，再经硫化液处理便形成棕黑色的硫化钴沉淀在酶活性部位。此酶利用酸或碱做前孵育处理，用碱做前孵育处理时，仅白肌纤维出现阳性反应，这对肌球蛋白atpase是特异性的；用酸做前孵育处理时，红肌纤维首先倍染色。因此钙激活法的atpase染色主要用来区分红肌和白肌，这对神经性肌wei缩和肌源性肌wei缩的诊断有一定价值。本产品仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
产品组成：
产品组成
4×50ml
保存条件
试剂(a): 酸性孵育液
50ml
4℃
试剂(b): 碱性孵育液
50ml
4℃
试剂(c):
atpase孵育液
试剂(c1): atpase孵育液a
25ml
4℃
试剂(c2): atpase孵育液b
25ml
4℃
试剂(d): atpase钴溶液
50ml
4℃ 避光
试剂(e): atpase硫化溶液
2×1ml
4℃ 避光
需自备的仪器和用品：
骨骼肌等组织的冰冻切片、水浴锅或恒温箱、蒸馏水、梯度乙醇、中性树胶、二甲苯或环保浸蜡脱蜡透明液。
操作步骤 (仅供参考) ：
1.取新鲜组织，低温恒冷冰冻切片(用液氮快速冷冻效果更佳)，厚度6μm，连续切片贴于玻片上，分别命名为a片、b片，切片不需要固定。
2.配制atpase孵育液：atpase孵育液a和atpase孵育液b等比例混合即可，ph应为9.3~9.5，即配即用。
3.配制atpase硫化工作液：atpase硫化溶液用蒸馏水稀释50~100倍即可，即配即用。
4.酸性孵育液、碱性孵育液和atpase孵育液使用前应提前37℃孵育10min。
5.a片浸入酸性孵育液，37℃孵育5min，水冲洗5s，再浸入碱性孵育液37℃孵育30s，水冲洗5s。
6.取b片浸入碱性孵育液，37℃孵育15min，水冲洗5s。
7.将a片和b片浸入atpase孵育液，37℃孵育30~60min，水冲洗5s。
8.入atpase钴溶液孵育3min，水冲洗5s。
9.切片入硫化工作液，孵育30~60s，水冲洗30s。
10.常规脱水透明，中性树胶封固。
染色结果：atpase主要呈黑色或棕黑色。
肌纤维类型
酸性孵育液
碱性孵育液
i(红肌)
深
淡
iia(白肌)
淡
深
iib(白肌)
中度
深
注意事项：
1.三磷酸腺苷酶经固定后活性大受影响，因此切片不经固定。
2.atpase孵育液经混合后ph接近9.4，此时比较适宜酶的染色，如有条件，应测定并调整ph合格后再使用。如果ph偏离很大或出现沉淀都可能导致染色失败，应即配即用。
3.atpase硫化液有腐蚀性和刺激性气味，应小心操作。每次用过后应拧紧盖子，否则容易挥发失效。配制硫化工作液时应在通风橱内操作。
4.atpase硫化工作液配后不久自行分解而失效，应每次小量配制。
5.冰冻切片染色时，应减少切片在室温暴露的时间。
6.染色效果与酸性孵育液、碱性孵育液、atpase孵育液的ph变化有很大关系，尽量减少改变ph的因素，如避免反复开盖、避免室温放置过久等。
7.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期： 6个月有效。4℃运输，4℃保存。