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大鼠IV型胶原酶(COL-IV)酶联免疫检测

2024/4/16 10:30:07发布9次查看
大鼠iv型胶原酶(col-iv)酶联免疫
检测试剂盒使用说明书 ae90665ra
使用前仔细阅读本说明书。本酶联免疫试剂盒是基于双抗体夹心技术原理,来检测大鼠iv型胶原酶(col-iv),只能用于研究用途,不得用于医学诊断。
用 途:用于大鼠血清、血浆及相关液体样本中iv型胶原酶(col-iv)测定。
工作原理:
本试剂盒采用的是*双抗体夹心酶联免疫吸附法(elisa)测定样品中大鼠iv型胶原酶(col-iv)水平。向预先包被了大鼠iv型胶原酶(col-iv)单克隆抗体的酶标孔中加入大鼠iv型胶原酶(col-iv),温育;温育后,加入*标记的抗iv型胶原酶(col-iv)抗体。再与链霉亲和素-hrp结合,形成免疫复合物,再经过温育和洗涤,去除未结合的酶,然后加入底物a、b,产生蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅与样品中大鼠iv型胶原酶(col-iv)的浓度呈正相关。
试剂盒组成:
试剂盒组成
48孔配置
96孔配置
保存
说明书
1份
1份
封板膜
2片(48)
2片(96)
密封袋
1个
1个
酶标包被板
1×48
1×96
2-8℃保存
标准品12ng/ml
0.5ml×1瓶
0.5ml×1瓶
2-8℃保存
标准品稀释液
3ml×1瓶
6ml×1瓶
2-8℃保存
链霉亲和素-hrp
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8℃保存
*标记的抗col-iv抗体
0.5ml×1瓶
1ml×1瓶
2-8℃保存
显色剂a液
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8℃保存
显色剂b液
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8℃保存
终止液
3ml×1瓶
6ml×1瓶
2-8℃保存
浓缩洗涤液
(20ml×20倍)×1瓶
(20ml×30倍)×1瓶
2-8℃保存
需要而未提供的试剂和器材:
37℃恒温箱。标准规格酶标仪。精密移液器及一次性吸头蒸馏水,一次性试管吸水纸
注意事项:
从2-8℃取出的试剂盒,在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.为避免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和封板膜。不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。底物b对光敏感,避免长时间暴露于光下。
洗板方法:
手工洗板方法:甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内,浸泡1-2分钟。根据需要,重复此过程数次。
自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中
标本要求:
1.不能检测含nan3的样品,因nan3抑制辣根过氧化物酶的(hrp)活性。
2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
操作程序:
标准品的稀释:(本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。)6ng/ml
5号标准品
120μl的原倍标准品加入120μl标准品稀释液
3ng/ml
4号标准品
120μl的5号标准品加入120μl标准品稀释液
1.5ng/ml
3号标准品
120μl的4号标准品加入120μl标准品稀释液
0.75ng/ml
2号标准品
120μl的3号标准品加入120μl标准品稀释液
0.375ng/ml
1号标准品
120μl的2号标准品加入120μl标准品稀释液
根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。加样:1)空白孔,空白对照孔不加样品,*标记的抗col-iv抗体,链霉亲和素-hrp,只加显色剂a&b和终止液,其余各步操作相同;2)标准品孔:加入标准品50ul,链霉亲和素-hrp50ul(标准品中已事先整合好*抗体,故不加);3)待测样品孔:加入样本40ul,然后各加入抗col-iv抗体10ul、链霉亲和素-hrp50ul,盖上封板膜,轻轻震荡混匀,37℃温育60分钟。配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。显色:每孔先加入显色剂a50ul,再加入显色剂b50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(od值)。测定应在加终止液后10分钟以内进行。根据标准品的浓度及对应的od值计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样品的od值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。
操作程序总结:
试剂盒性能:
1.样品线性回归与预期浓度相关系数r值为0.92以上。
2.批内与批间应分别小于9%和15%
检测范围:
检测范围:0.2ng/ml-9 ng/ml
保存条件及有效期:
保存:2-8℃。
有效期:6个月(2-8℃)。
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