用稀释液代替检测样本、用以观测zui终反应的显色“本底”、并用于酶标仪消除、扣除“本底”，即：以本底为“零”读取阳性、阴性对照孔和样本检测孔的吸光值（a）；或者，在计算阴性对照均值（ncx）、阳性对照均值（pcx）、样本读数的s/c.o.值时减去空白对照的本底吸光值。
阴性对照，应当是本项检测试验中采用与待捡物具有同源性和同质性，又不含有待检物质，并能客观比较和鉴别处理因素（血清免疫学试验中有特异性抗原与抗体反应）之间的差异。　阴性对照的基本组成也应该尽量与检测样本的组成一致，先行检测确定其中不含待检物质。比如，检测人血清标本时，阴性阳性对照同阴性对照，只是采用“精选”的含有待检物质的人血清制备而成。所谓“精选”，就是把收集的阳性人血清经过数种试验进行“筛试”、把含有“干扰性物质”的血清剔除、不用，以避免出现“假阳性”干扰试验结果。
阳性对照的基本组成应该尽量与检测样本的组成一致，一般阳性对照多以含蛋白保护剂的缓冲液为基质，加入一定量的待检物质。比如，以人血清为标本的测定，阳性对照多用确定的病人血清或者以复钙人血浆为原料加入一定量标准品。