dna加热到一定温度时,dna的双螺旋结构就会发生裂解,dna碱基互补的主要作用力氢键结构就会被破坏,这种变性过程称为dna熔解,通常将dna变性,即增色效应达到一半时的温度,称为dna解链温度,也称为熔解温度或者叫做dna熔点(tm和的dna熔解测定,是紫外可见吸收光谱法,在紫外光谱法中表现为吸光度的增加(增色效应)。吸收强度与温度关系曲线的拐点即确定的熔点。
德国耶拿分析仪器股份公司,采用紫外分光光谱仪specord® 200 plus和帕尔贴控温装置相配合,具有控温精度高,升温无延迟等优点,根据dna测定应用要求,在不同的计量模式下,可以随意编程温度程序。
利用超微量比色皿,对质粒dna水溶液和小牛胸腺两种样本的dna熔点进行了测定,样品光谱在220nm和300nm处有大吸收峰。分别采用了‘同步’测量模式和‘循环’测量模式。
结果表明,在dna样本熔化过程可以很好地显示在两个测量模式中。小牛胸腺dna的吸光度的增加比天然dna发生温度低。天然dna通常在85°c以上高温下经常融化,小牛胸腺dna熔点高于此温度。此外,碱基对比例越高,熔点也会降低。
