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T4 DNA Ligase

2024/4/13 17:21:41发布26次查看
t4dnaligase即t4dna连接酶,可以催化粘端或平端双链dna或rna的5'-p末端和3'-oh末端之间以磷酸二酯键结合,该催化反应需atp作为辅助因子。同时t4dna连接酶可以修补双链dna、双链rna或dna/rna杂合物上的单链缺刻(single-strand nicks)。
用途:t4dnaligase常用于dna片段和载体、linker或adaptor等的连接。也可以用于缺刻修复及ligase介导的rna检测。
来源:本t4dnaligase由大肠杆菌表达,表达基因的来源为t4嗜菌体。
活性定义:one unit is defined as the amount of enzyme required to give 50% ligation of hindiii fragments of
lambda dna in 30 min at 16℃ in 20 μl of the assay mixture containing 50 mm tris, ph 7.5, 10 mm mgcl2, 10 mm dtt, 1 mm atp, 25 μg/ml bsa and a 5'-dna termini concent
ation of 0.12 μm (300 μg/ml)。200u等于1个weiss unit,以weiss unit计,本产品共200单位。
纯度:不含dna内切酶、外切酶和磷酸酯酶,不含rna酶,满足常规连接反应要求。
酶储存溶液:20 mm tris, ph 7.5, 50 mm kcl, 1 mm dtt, 0.1 mm edta and 50% (v/v) glycerol。
10x ligation buffer:400 mm tris, ph 7.8, 100 mm mgcl2, 100 mm dtt, 5 mm atp。
失活或抑制:65℃孵育10分钟可以导致t4 dna ligase失活;nacl或kcl浓度大于200mm时强烈抑制t4 dna ligase。
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