试剂配制和准备1.depc水或rnase free水；2.75%乙醇（现配后预冷）：用无水乙醇和depc水配制（depc水：无水乙醇=1：3），然后放4℃备用。1.5mldepc水+4.5ml无水乙醇；3.异丙/醇：棕色瓶；4.lv仿：棕色瓶；5.trizol：存放于4℃。rna抽提1.匀浆：在通风橱中往含有组织块的ep管中加入trizol和磁珠（组织100mg+1ml trizol +2颗研磨珠）。2.研磨：设置研磨时间和频率，一般卵巢组织为65hz，120s；随后可以继续实验或者冻存在-80℃。3.轻柔颠倒混匀10下，室温孵育5min。4.在通风橱中加入lv仿1/5 trizol体积（0.2ml）。5.轻柔颠倒混匀15s，室温孵育2~3min。6.4℃下离心，12000g，15min；观察液体分层：底层—红色酚-lv仿相；中间层—粉红色的交界相；上层—无色液相，即rna层。7.rna分离：用移液枪将上清转入新的1.5mlep管中（预估上清的容积，大约500μl，调好移液枪），加入0.5ml（与样品上清等量）异丙醇，盖紧后颠倒混匀后室温静置10分钟。8.4℃下离心，12000g，15min；小心弃去上清（倒去管中液体，残留液体用枪头在管口吸掉液体），注意底部的乳白色沉淀物即为rna。9.往沉淀中加1ml 75%的乙醇（用depc水或rnase free水现配，预冷），颠倒混匀洗涤rna沉淀一次。10.4℃下离心，12000g，5min。11.用移液枪小心弃去上清（倒去管中液体，残留液体用枪头在管口吸掉液体），置于超净台上吹干10-15min，让乙醇挥发。注意：不能太干，肉眼观察管壁和管底见得到的液体消失后即可，此时rna沉淀稍变透明。注意不能让rna沉淀干燥。勿开紫外；室温吹干不可太长，rna易降解。12.在管中加10~20uldepc水或rnase free水溶解，37℃水浴锅温水浴10min，使rna溶解。13.测浓度评估提取的rna质量：a260/280在1.8-2.0之间；a260/230在2.0左右；a260在0.1-1之间。14.rna的保存：提取的rna保存于-80℃超低温冰箱中，最好立即反转录以cdna形式保存于-20℃冰箱。