t细胞在体外培养时,受到非特异性有丝分裂原(如pha、cona)刺激后,可出现细胞体积增大,代谢旺盛,蛋白和核酸合成增加,即向淋巴母细胞转化.淋巴细胞转化率的高低可以反映机体的细胞免疫水平,因此可作为测定机体免疫功能的指标之一.
t 细胞在体外培养时,受到非特异性有丝分裂原(如pha、cona)刺激后,可出现细胞体积增大,代谢旺盛,蛋白和核酸合成增加,即向淋巴母细胞转化.淋巴细胞转化率的高低可以反映机体的细胞免疫水平,因此可作为测定机体免疫功能的指标之一.
淋巴细胞转化试验有形态计数法、mtt 法和同位素法三种.mtt 法即四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法.mtt 是一种噻唑盐,化学名3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四唑,水溶液为黄橙色.小鼠脾细胞受到cona 作用后发生增殖活化,其胞内线粒体琥珀酸脱氢酶活性相应升高,mtt 作为其底物参与反应,形成蓝色的甲臜(formazan)颗粒沉积于细胞内或细胞周围,经盐酸─异丙醇溶解后为蓝色溶液,可用酶标测定仪测定细胞培养物的od 值,测定波长570nm.根据od 值的大小计算反应体系中细胞增殖程度.
3h-tdr 掺入法:细胞增殖的基本条件或前提为细胞质和细胞核的复制,这是正常细胞增殖过程缺一不可的前提.一般来说,一个细胞周期可大致分为四期,即g1 期、s期、g2 期和m期.其中s期为dna合成期,主要功能活动为dna合成.3h-tdr即(甲基-3h)胸腺嘧啶核苷([3h-methyl]thymidine),是dna合成的前体.加入细胞培养液中后被细胞摄取作为dna合成的原料.细胞合成的dna越多,则所掺入的3h-tdr就越多,因此,检测所掺入的3h-tdr就可反映原代细胞增殖的程度.因该方法有同位素污染问题,故我们实习中仍用mtt法.
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原代细胞