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小鼠神经干细胞培养Protocol

2024/4/9 3:58:28发布18次查看
复苏:
将小鼠神经干细胞冻存管从液氮中取出,置于37℃水浴中使之迅速融解,取出后拿到超净台内用75%酒精擦拭冻存管旋口处及外壁,防止污染。 将冻存管内细胞悬液转移至含3-4 ml小鼠神经干细胞*培养液的15 ml离心管内,以1000 rpm,离心5 min。 离心后将上清液吸除,另加入新鲜的小鼠神经干细胞*培养液2 ml,吹打悬浮。 轻轻吹打,制成单细胞悬液,尽量避免气泡。 按照小鼠神经干细胞说明书中建议复苏培养体系转移至一个t25培养瓶中培养,加入培养液6 ml。 放入37℃培养箱内培养。 复苏第二天观察,如死细胞较多,更换新鲜的小鼠神经干细胞*培养液,可以使细胞生长的更好。传代:
待细胞长到80%满时进行传代,一般2-3天,具体视细胞生长情况。 吸除废液。 用pbs(不含钙镁离子)轻轻冲洗一遍。 加入1-2 ml的0.05%胰酶(含edta)至培养瓶,轻轻晃动,使胰酶覆盖底面,置于37℃培养箱内消化细胞。 在显微镜下观察,直至细胞层全部脱落(一般需要5-15 min)。 加2 ml小鼠神经干细胞*培养液终止消化。 1000 rpm离心5 min,去上清,加入小鼠神经干细胞*培养液2 ml。 多次轻轻吹打细胞,制成单细胞悬液。 按照1:4-1:10的比例进行传代。 放入37℃培养箱内培养。冻存:
按传代的方法将细胞消化下来,制成细胞悬液。 以1000 rpm,离心5 min,弃上清,逐滴加入已经预冷的冻存液,悬浮细胞。 按每支冻存管内加入500 ml细胞悬液分装到冻存管内,标记细胞名称、代数、冻存日期等基本信息。 将冻存管置于程序降温盒内,-80℃过夜,转入液氮。冻存液配方:小鼠神经干细胞*培养液 90%,dmso 10%
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