1. 调整待测细胞的浓度为5×105-1×106个/ml。 2. 取1ml细胞，1000rpm，4℃离心10分钟，弃上清。 3. 加入1ml预冷的pbs，轻轻震荡使细胞悬浮，1000rpm，4℃离心10分钟，弃上清（对于贴壁细胞，先用*消化，再用pbs洗涤）。 4. 重复步骤3两次。 5. 将细胞重悬于200μl binding buffer。 6. 加入10μl annexin v-fitc和10μl pi，轻轻混匀，避光室温反应15分钟 或4℃反应30 分钟。 7. 加入300μl binding buffer，在1小时内用流式细胞仪检测。 8. 若用荧光显微镜检测，将细胞混合液离心，取细胞沉淀涂片，再进行观察。
使用细胞凋亡检测试剂盒的注意事项
为保证得到理想的实验结果在使用此试剂盒之前请认真阅读该注意事项。
1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
2.annexin v-fitc和propidium iodide是光敏物质，在保存与操作时请注意避光。
3.propidium iodide（pi）能通过皮肤吸收，对眼睛有刺激作用。
4.在细胞洗涤的后一步，请尽量将上清弃净，以免pbs残留影响实验结果。
5.pi染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高，建议首先进行annexin v-fitc染色，上机前5分钟再加入pi染色。
6.整个操作过程动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞，尽量在4℃下操作。
7.反应完毕后请尽快检测，因为细细胞凋亡检测是一个动态的过程，反应1小时后荧光强度就开始衰变。
8.成功的检测凋亡受以下几种因素的影响，如细胞类型、细胞膜上ps的密度、发生凋亡时ps翻转的比例、诱导细胞凋亡的方法、所用试剂、诱导凋亡的时间等，把这些影响因素进行优化对实验成功是非常必要的。
l-乳酸脱氢酶 进口、国产 英文名称: lactic dehydrogenase(rabbit muscle) 含量: br，5000u/g
骨胶原酶 进口、国产 英文名称: collagenase 含量: br，2000-5000u/mg
* 进口、国产 英文名称: hyaluronidase 含量: 高纯，20000u/mg
辣根过氧化物酶 进口、国产 英文名称: pod 含量: br，2万u/mg
α-d-半乳糖苷半乳糖水解酶 进口、国产 英文名称: α-galactosidase preparation from green coffee beans 含量: 标准品，7万u/mg
乳糖酶 进口、国产 英文名称: β-galactosidase from escherichia coli 含量: br，1200u/mg
l-*去氢酶 进口、国产 英文名称: l-gldh 含量: br，45000u/mg
细胞凋亡检测