例如用半饱和的硫酸铵来沉淀出血清中的球蛋白,饱和硫酸铵可以使血清中的白蛋白,球蛋白都沉淀出来,盐析出沉淀的蛋白质,经透析除盐,仍保证蛋白质的活性。调节蛋白质溶液的ph至等电点后,再用盐析法则蛋白质沉淀的效果更好。盐析法分为两类,第一类叫ks分段盐析法,在一定ph和温度下通过改变离子强度实现,用于早期的粗提液;第二种叫b分段盐析法,在一定离子强度下通过改变ph和温度来实现,用于后续进一步分离纯化和结晶。影响盐析的因素包括:蛋白质浓度,离子强度和类型,ph值,温度等。
针对温度这一条,需要注意、在低离子强度或纯水中,蛋白质溶解度在一定范围内随温度增加而增加。但在高浓度下,蛋白质,酶和插入类物质的溶解度随温度上升而下降。在一般情况下,蛋白质对盐析温度无特殊要求,可在室温下进行,只有某些对温度比较敏感的酶要求在0-4℃进行。
使用硫酸铵沉淀蛋白需要注意:
硫酸铵中常含有少量的重金属离子,对蛋白质纳米基有敏感作用,使用前必须用h2s处理:将硫酸铵配成浓溶液,通入h2s饱和,放置少量,用滤纸除去另外,高浓度的硫酸铵溶液一般呈酸性(ph = 5.0左右),使用前也需要用nh₃·h₂0或硫酸调节至所需ph。
