类器官是一种在体外3d培养并模拟体内器官的细胞结构，可以更准确地保留体内细胞的生物学特性和功能。乳腺类器官可以准确再现体内乳房微环境，并已被用于检查影响信号转导、基因表达和组织重塑的因素。
乳腺类器官的培养方案我们根据clevers h发表的两篇文章[1][2]，整理了乳腺组织生成乳腺类器官的培养方案。该模型可用于长期培养源自正常人乳腺组织或乳腺癌组织的类器官。
图1.乳癌组织分化为乳腺类器官的过程(pmid: 33692550)[2]
1、从乳腺组织切除物中分离上皮细胞1.1将每个组织样本(<3-4 cm3)转移到装有d-bsa（dmem glutamax培养基中加入终浓度0.1%不含脂肪酸的bsa）的50 ml falcon试管中，手术刀将组织切成0.5-1 mm3小块（组织块看起来均匀且有点粘稠）；
1.2 d-bsa重悬洗涤几次，静置后去除上清
1.3加入type i型培养基，混匀，然后加入终浓度1 mg/ml的ii型胶原酶和10 μm y-27632，37°c消化1-2 h；
1.4 加入fbs终止消化，通过100 μm滤网过滤，450 g离心5 min去除上清；
1.5 如果沉淀物部分呈红色，加入红细胞裂解缓冲液，室温下孵育2 min，然后加入d-bsa，450 g离心5 min去除上清。
2、类器官培养2.1 bme（基底膜提取物，也可用matrigel替换）中重新悬浮细胞沉淀，混匀后，逐滴滴在12孔板中铺板，37°c倒置固化；
图2.bme滴在12孔板中的代表性图像(pmid: 33692550)[2]
2.2 添加适量的type i型(advanced dmem/f12，10% r-spondin1-conditioned medium，10% noggin-conditioned medium，1×b27+vita，10 mmnicotinamide，1.25 mm n-acetyl-l-cysteine，100 μg/ml primocin，5 μm y-27632，5 nm heregulin b1，5 ng/ml fgf-7，20 ng/ml fgf-10，0.5 μm a83-01，5 ng/ml egf，1 μm sb202190)或type ii型培养基(advanced dmem/f12，20% wnt3a-conditioned medium，10% r-spondin1-conditioned medium，10% noggin-conditioned medium，1×b27+vita，10 mmnicotinamide，1.25 mm n-acetyl-l-cysteine，0.5 μg/ml hydrocortisone，100 nm β-estradiol，10 μm forskolin，100 μg/ml primocin，5 μm y-27632，5 nm heregulin b1，20 ng/ml fgf-10，0.5 μm a83-01，5 ng/ml egf)，37°c和5% co2的培养箱中继续培养，每2-4天更换一次培养基，7-21天后可进行类器官传代。
图3.用type i型或type ii型培养基得到的乳腺类器官明场图像(pmid: 33692550)[2]
图4.乳腺类器官代表性明场图像，太稀疏（左）、太密集（中）或密度适中（右）(pmid: 33692550)[2]
相关产品产品名称
产品编号
规格
简介
y-27632
53006es
1mg/5 mg/10 mg
rock抑制剂
nicotinamide烟酰胺
51402es
1g/5g
sirtuins的非竞争性抑制剂
n-acetyl-l-cysteine
50303es
2 g
抗氧化剂
a83-01
53002es
1mg/5 mg/10 mg
alk5抑制剂
sb202190
53005es
5mg/10mg/25mg
p38 mapk抑制剂
forskolin
51001es
10 mg/50 mg/100 mg
提供camp水平
β-estradiol β-雌二醇
60802es
250 mg/1 g
雌激素
b-27 supplement,serum free,50x
60703es
10 ml
无血清添加剂
human egf
92708es
100μg/500μg
重组蛋白
human fgf10
91306es
5μg/100μg/500μg
重组蛋白
human fgf7
91304es
10μg/100μg/500μg
重组蛋白
human nrg1-beta1
92711es
10μg/100μg/500μg
重组蛋白
bovine serum albumin(bsa),fatty acid free
36104es
25 g/100 g/500 g/1 kg
用于细胞培养
参考文献[1] sachs n, et al. a living biobank of breast cancer organoids captures disease heterogeneity. cell. 2018 jan 11;172(1-2):373-386.e10.
[2] dekkers jf, et al. long-term culture, genetic manipulation and xenotransplantation of human normal and breast cancer organoids. nat protoc. 2021 apr;16(4):1936-1965.