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其他类elisa定量检测试剂盒检测标准

2024/3/29 22:19:08发布5次查看
其他类elisa定量检测试剂盒检测标准
如果实验过程中抗体间发生冲突或交叉反应,会影响到整个实验的特异性。其中抗体来源所带来的兼容性就是交叉反应的一个因素。现在购买源自动物的抗体越来越容易,仍需要确认一下是否会产生交叉反应。在用双抗夹心法进行elisa试剂盒检测时,检测用的二抗必须特异性针对检测一抗,而不能与捕获抗体起反应。如果检测用二抗与捕获抗体结合,实验特异性就会大打折扣。
通常我们选用源自不同宿主的捕获抗体和检测一抗,来避免上述问题。 如今检测elisa试剂盒有许多途径,我们可以根据自己的偏好进行选择。一般elisa试剂盒检测的是酶促反应的可溶性产物,抗体上结合有相应的酶(例如通常使用的辣根过氧化物酶hrp),而反应体系中添加有相应的底物(如3,3-二氨基联苯胺dab)。这种酶促反应生成具有特征性的颜色,可以通过分光光度计进行检测,碱性磷酸酶ap也是一种常用酶。酶可以结合在一抗上,也可以结合在二抗上,还可以使用链霉亲和素标记的酶与亲和素标记的一抗结合
在一步法测定中,当标本中受检抗原的含量很高时,过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合,而不再形成夹心复合物。类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象,elisa试剂盒此时反应后显色的吸光值(位于抗原过剩带上)与标准曲线(位于抗体过剩带上)某一抗原浓度的吸光值相同,如按常法测读,所得结果将低于实际的含量,这种现象被称为钩状效应(hook effect),因为标准曲线到达高峰后呈钩状弯落。钩状效应严重时,反应甚至可不显色而出现假阴性结果。因此在使用一步法试剂测定标本中含量可异常增高的物质(例如血清中hbsag、afp和尿液hcg等)时,应注意可测范围的zui高值。用高亲和力的单克隆抗体制备此类试剂可削弱钩状效应。
假使在被测分子的不同位点上含有多个相同的决定簇,例如hbsag的a决定簇,也可用针对此决定的同一单抗分别包被固相和制备酶结合物。但在hbsag的检测中应注意亚型问题,hbsag有adr、adw、ayr、ayw4个亚型,虽然每种亚型均有相同的a决定簇的反应性,elisa试剂盒这也是用单抗作夹心法应注意的问。此外elisa试剂盒的结果检测还包括放射性检测、荧光检测、化学发光或显色法检测等。
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