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支原体*

2024/3/28 17:14:34发布8次查看
支原体检测的核酸法,已广泛应用于细胞支原体筛查和生物制品企业的生产放行检测中。
但在使用pcr方法检测支原体之前,由于有些待检样品的成分过于复杂,或含有的某些成分会抑制pcr反应的进行,因此需要使用『支原体*』提前做dna的提取工作。
对于生物药或需遵循药典的样本,也由于样品基质可能会影响检测的灵敏度,因此需要样本做dna抽提处理,实现核酸法gao的灵敏度。
这里向您*德国mb公司生产的支原体*
英文品名:
venor®gem sample preparation kit
该试剂盒已经过多方广泛验证,有很多引用文献;
它已达到欧洲药典标准,可用于pcr或qpcr检测支原体的方法学验证。
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产品信息:
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产品特点
1)符合欧洲药典的要求。
2)采用离心管柱的方法,全程只需30分钟。
2)从细胞上清和生物制品中,均可分离支原体dna。
3)洗脱dna纯度高,体积50μl,保证pcr大的灵敏度。
3
操作步骤
四步法:
1)细胞裂解
2)dna吸附到核酸纯化柱上
3)去除残留污染物和抑制剂
4)dna洗脱
试剂盒组分:
spin columns(核酸纯化住)
collection tubes(收集管)
conditioner液
binding buffer液
buffer a1液
buffer a2液
buffer e液
操作示意图:
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所需其他材料及仪器:
>96%无水乙醇ep管(1.5ml或2ml)离心机和恒温仪(用于1.5ml 或2ml 离心管)移液器及带滤芯吸头(100μl 和1000μl)可选:蛋白酶k(货号56-0002),用于处理富含蛋白(>10mg/ml)的样品。可选:dna 内控对照,用于配合venor®gem classic kit(货号11-1025)
以保证操作过程没有问题。
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注意事项:
1. 支原体dna 提取试剂盒一次可从多含有1x 106细胞/ml 的细胞上清中直接分离dna。
2. 富含蛋白的样本(蛋白含量>10mg/ml)可能需要蛋白酶k 处理后,再抽提dna。
3. 此试剂盒不适于提取真核细胞组织的dna。
4. 若在提取dna时加入了内控dna对照,则在支原体核酸法检测时不需要再加内控对照。我们*使用对照,以验证结果的可靠性,也有助于排除故障。
5. 不要使用其他酒精来替代乙醇,它将导致核酸产量的下降。
6. 缓冲液e(buffer e)的预热,会显著改善核酸的产量。
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