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实验室培养细胞常见的问题有哪几点?让我们一起来了解

2024/3/25 12:00:27发布16次查看
1.如何选用培养基?
培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在mem中培养的细胞,很可能在dmem或m199中同样很容易生长。总之,mem做粘附细胞培养、rpmi-1640做悬浮细胞培养,各种目的无血清培养的是aim v培养 基(sfm)。
2.为什么要热灭活血清?
加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组胺,激活淋巴细胞和巨噬细胞。在进行免疫学研究、培养es细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。
3.l-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗?它在溶液中不稳定吗?
l-谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。脱掉氨基后,l-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。l-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解,但是确切的降解率一直没有zui终确定。l-谷氨酰胺的降解导致氨的形成,而氨对于一些细胞具有毒性。
4.glutamax-i是什么?培养细胞如何利用glutamax-i?这个二肽有多稳定?
glutamax-i二肽是l-谷氨酰胺的衍生物,将其不稳定的α-氨基用l-丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽,释放l-谷氨酰胺供利用。
glutamax-i二肽非常稳定,即使在121磅灭菌20分钟,glutamax-i二肽溶液有zui小的降解,如果在相同条件下,l-谷氨酰胺几乎*降解。
5.为什么培养基中可以省去加酚红?
酚红在培养基中被用来作为ph值的指示剂:中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时为紫色。研究表明,酚红可以模拟固醇类激素的作用(特别是雌激素)。为避免固醇类反应,培养细胞,尤其是哺乳类细胞时,用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测,一些研究人员在做流式细胞检测时,不使用加有酚红的培养基。
6.如何用台盼兰计数活细胞?
用无血清培养基把细胞悬液稀释到200-2000个/毫升,在0.1毫升的细胞中加入0.1毫升的0.4%的台盼兰溶液。轻轻混匀,数分钟后,用血球计数板计数细胞。活细胞排斥台盼兰,因而染成蓝色的细胞是死细胞。
7.如何消除组织培养的污染?
当重要的培养污染时,研究者可能试图消除或控制污染。首先,确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母,把污染细胞与其它细胞系隔离开,用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台,检查hepa过滤器。
高浓度的抗生素和抗霉菌素可能对一些细胞系有毒性,因而,做剂量反应实验确定抗生素和抗霉菌素产生毒性的剂量水平。这点在使用抗生素如两性霉素b和抗霉菌素如泰乐菌素时尤其重要。下面是推荐的确定毒性水平和消除培养污染的实验步骤。
1)在无抗生素的培养基中消化、计数和稀释细胞,稀释到常规细胞传代的浓度。
2)分散细胞悬液到多孔培养板中,或几个小培养瓶中。在一个浓度梯度范围内,把选择抗生素加入到每一个孔中。
例如,两性霉素b推荐下列浓度,0.25,0.50,1.0,2.0,4.0,8.0 mg/ml。
3)每天观测细胞毒性指标,如脱落,出现空泡,汇合度下降和变圆。
4)确定抗生素毒性水平后,使用低于毒性浓度2-3倍浓度的抗生素的培养液培养细胞2-3代。
5)在无抗生素的培养基中培养细胞一代。
6)重复步骤4。
7)在无抗生素的培养基中培养4-6代,确定污染是否以已被消除。
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