为什么要研究树突状细胞？
t和b淋巴细胞是适应性免疫系统的基本效应细胞，但apc（抗原递呈细胞）作为其上游，起着守门员的角色，几乎可以启动和塑造任何适应性免疫反应。树突状细胞（dc）就是apc中递呈抗原能力zui强的一种。
越来越多的证据表明，dc对于致耐受性或促炎性局部免疫环境是至关重要的，因此，在自身免疫性疾病以及癌症等疾病中，将dc的生物学机制研究清楚，就可能揭示治疗干预的新方法。
那么如何精细分出dc亚群呢？
在过去的十年中，小鼠和人类树突状细胞分类逐渐细化，这在很大程度上得益于流式细胞术和单细胞rna测序（sc-rnaseq）领域的技术发展。
在此，我们根据新的基于sc-rnaseq的分类，设计了28色方案来深入区分人dc亚群。大致思路如下：
采用cd45以在非淋巴组织样品中区分造血细胞与污染的基质细胞。
为区分dc亚群，用cd11c、hla-dr、cd141（也称为bdca-3，标记cdc1）、cd1c（bdca-1，标记cdc2）和cd123（pdc）。
增加15个表面分子，每个表面分子与炎症性疾病或抗肿瘤免疫的dc功能相关：共刺激分子cd40、cd80和cd86；低亲和力fc-受体cd16（fccriiia）和cd32（fccriia/b）；趋化因子受体ccr7和cx3cr1；清道夫受体cd163；补体受体cd11b；cd85k（也称为ilt-3）；btla（cd272，也称为b和t淋巴细胞衰减分子）；cd26，cd38和cd172（也称为sirpa）。
为了更地圈门，加上了排除性的谱系标记物cd3（pan t细胞）、cd14（经典单核细胞）、cd19（b细胞）、cd56（nk细胞）以及cd4和cd8。
结合ccr7和cd45ra，该方案同时可评估t细胞亚群的分化状态。值得注意的是，ccr7也被证明是dc向引流淋巴结迁移所必需的。
❖详细
❖分析步骤详解
步，首先是常规的圈取液流稳定部分、选择单个核细胞区域、排除粘连体、圈选cd45+活细胞区域。
第二步，通过cd16/cd14，圈出cd14+单核细胞和cd14-细胞，接着将cd14-细胞显示在cd19/cd3图上，圈出cd3+t细胞、cd19+b细胞、cd3-cd19-细胞，在这里cd3+t可通过cd4/cd8分为cd4+t、cd8+t、dnt三个主要亚群;
对cd4+t和cd8+t两个亚群，可进一步通过ccr7和cd45ra圈出其中naive功能状态的亚群；而cd19+b细胞则可继续分析其cd80+的比例。
第三步，对第二步中圈出的cd14-cd3-cd19-部分细胞，进一步用cd56/cd123散点图分析，圈出cd56+nk、cd123高表达的pdc、cd56-cd123low的dc候选群体，接着可根据cd11c/hla-dr，圈出准确的双阳性dc群体，后根据cd141/cd1c分析dc（不包括pdc）中的三个亚群：cd141+dc、cd1c+dc、dn dc。
第四步，分析pdc、cd141+dc、cd1c+dc、dn dc四个亚群中cd26、btla、cd32、cd38、cx3cr1、cd85k、cd11b、sirpa、cd40、cd86、cd45ra的表达水平。
后一步，利用fmo作为设门对照，分析总dc中cx3cr1、cd85k、cd40、cd163、cd86的表达水平。
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