一、免疫动物选择
根据需要产生目标抗原的免疫反应,选择合适的免疫动物。例如,小鼠是免疫动物之一,因其易于操作且在免疫应答方面较为强大。
二、抗原免疫
将目标抗原注射到免疫动物体内,通常需要多次免疫以激发免疫反应。可以选择不同的免疫路线,如皮下、腹腔、静脉等。
三、细胞融合
从免疫动物获得脾细胞或淋巴细胞,与骨髓瘤细胞或其他癌细胞(如sp2/0、ns0等)融合,形成杂交瘤细胞。融合细胞通常使用(peg)或电穿孔等方法促进细胞融合。
四、杂交瘤细胞筛选
对融合细胞进行筛选,一般使用hat选择性培养基,通过对非杂交瘤细胞和单克隆杂交瘤细胞的抗代选择,筛选出产生目标抗体的单克隆杂交瘤细胞。
五、单克隆抗体生产
从筛选出的单克隆杂交瘤细胞中获取单一细胞系,并进行大规模培养和产生抗体。一般可采用体外或体内方式。
