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进口elisa试剂盒检测原理的方法

2024/3/22 10:56:03发布26次查看
进口elisa试剂盒检测原理:
进口elisa试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(elisa)。往预先包被人组胺(his)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、hrp标记的检测抗体,经过温育并*洗涤。用底物tmb显色,tmb在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的人组胺(his)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(od 值),计算样品浓度。
进口elisa试剂盒注意事项:
1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
3. 消除板底残留的液体和手指印,否则影响od值。
4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用。
5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
6. 在储存和温育时避免强光直接照射。
7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
8. 任何反应进口elisa试剂盒不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
9. 不能使用过期产品。
10. 如果可能传播疾病,所有的样品都应管理好,按照规定的程序处理样品和检测装置。
进口elisa试剂盒操作步骤:
从室温平衡60min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
设置标准品孔进口elisa试剂盒和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μl;
待测样本孔先加待测样本10μl,再加样本稀释液40μl;
随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(hrp)标记的检测抗体100μl,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
每孔加入底物a、b各50μl,37℃避光孵育15min。
每孔加入终止液50μl,15min内,在450nm波长处测定各孔的od值。
结果判断:
绘制标准曲线:在excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应od值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。
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