1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 240nm,蒸馏水调零。
2、cat 检测工作液的配制:用时在试剂二中加入 25ml 试剂一,充分混匀,作为工作液。
3、测定前将 cat 检测工作液在 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴 10min 以上。
4、在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μl 样本和 190μl 工作液,立即混匀并计时,记录
240nm 下初始吸光值 a1 和 1min 后的吸光值 a2。计算 δa=a1-a2。
粗酶液提取:
1、细菌、细胞或组织样品的制备
收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每 500 万细菌或细胞加入 1ml 提取液, 超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200w,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
称取约 0.1g 组织,加入 1ml 提取液进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置 冰上待测。
2、血清(浆)样品:直接检测。
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