用此法区别作用央求试验条件非常稳定，试剂的制备有必要规范化，阳性和阴性的对照品应符合一定的规范，须配用精密的仪器，并严重按规则操作。
elisa试剂盒中的阴性对照品为不含hbsag的复钙人血浆，目视法简捷明晰，但颇具主观性。测得a值后，先核算阴性对照a值的平均数（nc x ）和阳性对照a值的平均数（pcx），两个平均数的差（p-n）有必要大于一个特定的数值（例0.400），试验才有用。
elisa试剂盒试验3个阴性对照a值均应≥0.5×ncx，并≤1.5×ncx，如其中之一超出此计划，则弃去，算了另两个阴性对照从头核算ncx；如有两个阴性对照a值超出以上计划，则该次试验无效。在条件许可下，应该用比色计测定吸光值，这么能够得到客观的数据。 现举某种检查 hbsag的试剂盒为例,先读出标本（sample，s）、阳性对照（p）、和阴性对照（n）的吸光值，然后进行核算。核算方法有多种，大致可分为阳性断定值法和标本与阴性对照比值法两类。阳性对照品hbsag的含量标明为p=9±2ng /ml。每次试验设2个阳性对照和3个阴性对照。