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详解细胞培养领域的实验步骤

2024/3/12 6:50:44发布11次查看
细胞培养添加组分包括以下几大类物质
(1)促贴壁物质:许多细胞必须贴壁才能生长,这种情况下无血清培养基中一定要添加促贴壁和扩展因子,一般为细胞外基质,如纤连蛋白、层粘连蛋白等。它们还是重要的分裂素以及维持正常细胞功能的分化因子,对许多细胞的繁殖和分化,起着重要作用。纤连蛋白主要促进来自中胚层细胞的贴壁与分化,这些细胞包括成纤维细胞、肉瘤细胞、粒细胞、肾上皮细胞、肾上腺皮质细胞、cho细胞、成肌细胞等。
(2)促生长因子及激素:针对不同细胞添加不同的生长因子。激素也是刺激细胞生长、维持细胞功能的重要物质,有些激素是许多细胞*的,如胰岛素。
(3)酶抑制剂:培养贴壁生长的细胞,需要用*消化传代,在无血清培养基中*须含酶抑制剂,以终止酶的消化作用,达到保护细胞的目的。常用的是大豆*;抑制剂。
(4)结合蛋白和转运蛋白:常见如转铁蛋白和牛血清白蛋白。牛血清白蛋白的添加比较大,可增加培养基的粘度,保护细胞免受机械损伤。许多旋转式培养的无血清培养基都含有牛血清白蛋白。
(5)微量元素:硒是常见的。
二、使用方法:目前,血清仍是动物细胞培养中基本的的添加物,尤其是在原代培养或者细胞生长状况不良时,常常会先使用有血清的培养液进行培养,待细胞生长旺盛以后,再换成无血清培养液。细胞转入无血清培养基培养要有一个适应过程,一般要逐步降低血清浓度,从10%减少到5%,3%,1%,直至无血清培养。在降低过程中要注意观察细胞形态是否发生变化,是否有部分细胞死亡,存活细胞是否还保持原有的功能和生物学特性等。在实验后这些细胞一般不再继续保留,很少有细胞能够长期培养于无血清培养基而不发生改变的。细胞转入无血清培养之前,要留有种子细胞,种子细胞按常规培养于含血清的培养基中,以保证细胞的特性不发生变化。
为了使细胞培养适应无血清培养,关键的是使所培养细胞:
●处于对数生长中期
●>90% 活细胞率
●适应时以较高的起始细胞接种
tectorigenin 含量: 进口/国产 鸢尾黄素 20mg/支 英文名称 hplc≥98% 规格:
tectoridin 含量: 进口/国产 鸢尾苷(射干苷) 20mg/支 英文名称 hplc≥98% 规格:
schizandrin a 含量: 进口/国产 五味子甲素 20mg/支 英文名称 hplc≥98% 规格:
schizandrin b 含量: 进口/国产 五味子乙素 20mg/支 英文名称 hplc≥98% 规格:
schisandrin 含量: 进口/国产 五味子醇甲 20mg/支 英文名称 hplc≥98% 规格:
schizandrol b 含量: 进口/国产 五味子酯乙 20mg/支 英文名称 hplc≥98% 规格:
schizandrol a 含量: 进口/国产 五味子酯甲 20mg/支 英文名称 hplc≥98% 规格:
细胞培养
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