细胞转染是指取对数生长的细胞,接种于培养板,加培养液,培养过夜(细胞长至85-90%满);按说明书进行转染实验。转染时应注意预备脂质体/dna混合物必须在无血清下进行。在转染之前更换培养基,可提高转染效率,但所用培养基必须37℃预温。 脂质体/ dna混合物应当逐滴加入,尽可能保持一致,从培养皿一边到另一边,边加入边轻摇培养皿,以确保均匀分布和避免局部高浓度。
对于细胞转染,一般在细胞中期转染,转染效率会相对高一些。这个时候的细胞状态是的。对于hek293t来说,一般转染的时间是在传代后24hr以内。转染后48hr,外源基因肯定是有表达的。至于72hr,应该也还是有表达的,atcc细胞可能表达量会很低,主要是这个时间点的细胞大部分都衰老了。建议293t收集细胞,在转染后36-48hr收集。
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