1. dna模板
2.对应目的基因的特异引物(在pcr反应中,新合成的dna是要接在一小段序列上才能继续按照模板dna复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是dna也可以是rna,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×pcr buffer
4.2mm dntpmix:含datp、dctp、dgtp、dttp各2mm
5.taq酶
注意事项
1.pcr反应应该在一个没有dna污染的干净环境中进行。设立一个的pcr实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有*影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.pcr试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.pcr的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。
