步骤
一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂去除 rna 酶的双蒸水10xrt-pcr 缓冲液（去除 rna 酶的双蒸水，100 mmol/ltris-hcl、ph8.3，500 mmol/lkc1,15 mmol/lmgcl2)2. 酶和酶缓冲液mmlv 逆转录酶（100~200u/ul)superaseinrna 酶抑制剂（20u/ul;ambion)3. 核酸和寡核苷酸dntp 混合物（10 mmol/l，包含所有四种 dntp)随机引物（5umol/l)总 rna(达到 2.5ug)4. 实验器材薄壁的 pcr 管二、方法1. 在冰上加 2ul50umol/l 的随机引物到薄壁的 pcr 管中（一个反应一管)。2. 加入 2.5ug 的总 rna。3. 加入 4ul 的 10 mmol/ldntp 混合物。4. 添加去除 rna 酶的双蒸水（rnase-freeh20)，使体积达到 16ul。5.70°c 加热 10min, 变性二级结构，然后立即放在冰上。6. 加 2ul 的 10xrt-pcr 缓冲液。7. 加1ul 的 20u/ulsuperaseln。8. 加1ul 的 100~200u/ulmmlv 逆转录酶。9.42°c 温浴 1h。10.95°c 加热10min, 灭活逆转录酶。11. 继续扩增步骤或停止反应，-2°c 储存。
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