2、可吸取50ul和100ul的移液器及吸头
3、4000转离心机
4、吸水纸或相当的吸水材料
5、450nm的酶标仪
6、计时器
7、20mm pbs:需自行配制
8、清洗液:需自行配制试剂配制:
1、20mm pbs: 0.62g nah2po4·2h2o+5.73g na2hpo4·12h2o+9gnacl,蒸馏水定容至1000ml
2、清 洗 液: 0.62g nah2po4·2h2o+5.73g na2hpo4·12h2o+9gnacl,蒸馏水定容至1000ml.+0.5ml 土温20样品的前处理: 肉类(稀释倍数:5)1、 称1g肉样,加入5ml的10%甲醇/20mmpbs,震荡2min;
2、 4000转离心5min;
3、 取2ml 上清液加入2ml异辛烷:氯仿(2:3),混匀;
v4、 4000转离心5min,取上层150ul测定。[/b]
测定过程:1、将所有试剂及样品回升至室温20-28℃,但不要放置超过24小时;
2、从铝箔袋中拿出要求数量的微孔条固定在微孔板架上,未使用的孔条与干燥剂一同放入密封袋中保存;
3、吸取150ul标准品、样品到对应微孔中,必须保证每种溶液使用干净的吸头吸取,避免交叉污染。加入
50ul三聚氰胺酶标记物到每个小孔中;
4、轻轻摇板60秒,20-28摄氏度下孵育30分钟;
5、将微孔中的溶液倒入水槽中,用清洗液*充满微孔,震荡后倒掉,重复三次,总共四次洗板;
6、*后一次清洗完后,倒掉孔中溶液,然后翻转微孔板在吸水纸上拍干;
7、每个微孔中加入100ul底物溶液;
8、20-28摄氏度下,孵育30分钟;
9、每个微孔中加入100ul停止液;
10、450nm下读板。
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