1.取材
对扫描电镜来说,样品可以稍大些,面积可达8×8mm,厚度可达5mm。对于易卷曲的样品如血管、胃肠道粘膜等,可固定在滤纸或卡片纸上,以充分暴露待观察的组织表面。
2.样品清洗
用扫描电镜观察的部位常常是样品的表面,即组织的游离面。由于样品取自活体组织,其表面常有血液、组织液或粘液附着,这会遮盖样品的表面结构,影响观察。因此在样品固定之前,要将这些附着物清洗干净。
清洗方法:
①用等渗的生理盐水或缓冲液清洗;
②用5%的苏打水清洗;
③用超声振荡或酶消化的方法进行处理。
3.固定
固定所用的试剂和透射电镜样品制备相同,常用戊二醛及锇酸双固定。由于样品体积较大,固定时间应适当延长,也可用快速冷冻固定。
4.脱水
样品经漂洗后用逐级浓度的酒精或丙酮脱水,然后进入中间液,一般用醋酸异戊酯作中间液。扫描电镜生物样品制备技术大多数生物样品都含有水分,而且比较柔软。因此在进行扫描电镜观察前,要对样品作相应的处理。扫描电镜样品制备的主要要求是尽可能使样品的表面结构保存好,没有变形和污染,样品干燥并且有良好导电性能。
关键词:制样设备
